3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 75

I fall av icke överensstämmande resultat (presumtivt positiva med 3M Molekylär Detektionsanalys 2 – E. coli O157
(inklusive H7), ej bekräftade med någon av de beskrivna metoderna ovan och i synnerhet för latexagglutinationstestet),
måste laboratoriet följa de obligatoriska stegen för att säkerställa validiteten för de erhållna resultaten.
Bekräftelse av resultat enligt NF VALIDATION-certifierad metod
I samband med NF VALIDATION måste alla prover som har identifierats som positiva av 3M Molekylär Detektionsanalys
2 – E. coli O157 (inklusive H7) bekräftas med ett av följande tester:
Alternativ 1: Använda standarden ISO 16654
Alternativ 2: Implementera en bekräftelsemetod som består av följande: Stryk 50 μl av den buffrade peptonvatten
anrikningen på en Cefixime Kaliumtellurit Sorbitol MacConkey (CT-SMAC)
37 °C. Stryk karakteristiska kolonier på näringsagar och genomför latexagglutinationstest direkt på isolerade kolonier. Om
3M Molekylär Detektionsanalys 2 – E. coli O157 (inklusive H7) resultat inte har bekräftats, utför ett immunomagnetiskt
separationssteg och stryk sedan 50 μl på CT-SMAC.
Alternativ 3: Använd nukleinsyraundersökningar enligt beskrivning i standarden EN ISO 7218
kolonier (renade eller ej) från CT-SMAC (se alternativ 1 eller 2). Nukleinsyraundersökningarna måste vara annorlunda än de
som användes i 3M Molekylär Detektionsanalys 2 – E. coli O157 (inklusive H7).
Alternativ 4: Använd någon annan certifierad NF VALIDATION-metod, vars princip måste vara annorlunda än den som
används i 3M Molekylär Detektionsanalys 2 – E. coli O157 (inklusive H7). Hela protokollet för denna andra validerade
metod måste användas. Alla steg före starten av bekräftelsen måste vara gemensamma för båda metoderna.
I fall av icke överensstämmande resultat (presumtivt positiva med den alternativa metoden, ej bekräftade med någon
av de beskrivna metoderna ovan) måste laboratoriet följa de obligatoriska stegen för att säkerställa validiteten för de
erhållna resultaten.
Om du har frågor om specifika tillämpningar eller procedurer kan du besöka vår hemsida på www.3M.com/foodsafety eller
kontakta din lokala representant eller återförsäljare för 3M.
Bilaga A. Protokollavbrott: Förvaring och omprovning av prover
1. Återförslut lyseringsprovröret med ett rent lock (se avsnittet Lysering, 4.5) för att förvara ett värmebehandlat lysat.
2. Inkubera i minst 18 timmar före förvaring av ett anrikat prov.
3. Förvara vid 4 till 8 °C i upp till 72 timmar.
4. Förbered ett förvarat prov för amplifiering genom att vända det upp och ned 2–3 gånger så att det blandas.
5. Avlägsna locken från rören.
6. Placera de blandade lysatrören i 3M Molekylär Detektion, Insats för värmeblock och värm vid 100 ± 1 °C i 5 ± 1 minuter.
7. Ta bort stället med 3M Lyseringslösningsrör från värmeblocket, och låt det svalna i 3M Molekylär Detektion, insats för
kylblock i minst 5 minuter och högst 10 minuter.
8. Fortsätt enligt protokollet i avsnittet Amplifiering som beskrivs ovan.
Referenser:
1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 4A: Diarrheagenic Escherichia coli.
November 2015.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 5.09. Detection, Isolation and
Identification of Escherichia coli O157:H7 from Meat Products and Carcass and Environmental Sponges. Effective Date:
15 January 2015.
3. ISO 16654:2001 Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the detection of Escherichia
coli O157.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs – General rules for microbiological examination.
6. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination.
7. Installation Qualification (IQ)/Operational Qualification (OQ) 3M
Symbolförklaringar
www.3M.com/foodsafety/symbols
standard med utgångspunkt från den buffrade peptonvatten
(3)
Molecular Detection System. 3M Food Safety.
TM
9
(Svenska)
SV
-agarplatta. Inkubera i 24 ± 3 timmar vid
(3)
, som utförts på isolerade
(5)
-anrikningen.
(3)
-
(3)