3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 42

9. Posizionare il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare 3M nello Strumento per l'analisi
molecolare 3M e chiudere il coperchio per avviare l'analisi. I risultati sono forniti entro 60 minuti, sebbene quelli positivi
possano essere rilevati prima.
10. Una volta completata l'analisi, rimuovere il Vassoio per caricamento rapido per il sistema di rilevamento molecolare
3M dallo Strumento per l'analisi molecolare 3M e smaltire i tubi immergendoli in una soluzione di candeggina per uso
domestico 1-5% (diluita con acqua v:v) per 1 ora e lontano dall'area di preparazione dell'analisi.
AVVISO: per ridurre il rischio di falsi positivi dovuti alla contaminazione crociata, non aprire mai i tubi di reagente
contenenti DNA amplificato. Questo comprende il Controllo reagente 3M, il tubo di reagente per l'Analisi
molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento di E. coli O157 (compreso H7) e i tubi di Controllo della
matrice 3M. Smaltire sempre i tubi di reagente sigillati immergendoli in una soluzione di candeggina per uso
domestico 1-5% (diluita con acqua v:v) per 1 ora e lontano dall'area di preparazione dell'analisi.
Risultati e interpretazione
Un algoritmo interpreta la curva di emissione luminosa risultante dal rilevamento dell'amplificazione degli acidi nucleici. I
risultati sono analizzati automaticamente dal software e codificati mediante un colore in base all'esito. Un risultato positivo
o negativo è determinato dall'analisi di un numero di parametri unici della curva. I risultati presunti positivi sono riportati in
tempo reale mentre i risultati Negativi e da esaminare sono visualizzati al completamento dell'analisi.
I risultati presunti positivi vanno confermati in base alle procedure operative standard del laboratorio o seguendo un
metodo di conferma appropriato
arricchimento secondari, seguito dall'applicazione di un disco e dalla conferma degli isolati utilizzando metodi biochimici
e sierologici adeguati.
NOTA: anche un campione negativo non fornirà una lettura zero poiché il sistema e i reagenti di amplificazione
dell'Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento di E. coli O157 (compreso H7) riportano un valore di
"background" dell'unità di luce relativa (RLU).
Nel raro caso di emissione luminosa insolita, l'algoritmo la classifica come "Da esaminare". 3M consiglia all'utente di
ripetere l'analisi per qualsiasi campione da esaminare. Se il risultato continua a essere Da esaminare, procedere con il test
di conferma utilizzando il proprio metodo di elezione o come specificato dalle normative locali.
Nel caso di eventi discordanti (presunto positivo con l'Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento
di E. coli O157 (compreso H7), non confermato da uno dei mezzi suindicati, e in particolare per il test di agglutinazione
al lattice), il laboratorio deve agire di conseguenza per garantire la validità dei risultati ottenuti.
Conferma dei risultati secondo il metodo certificato NF VALIDATION
Nel contesto del NF VALIDATION, tutti i campioni identificati come positivi dall'Analisi molecolare 3M di seconda
generazione per il rilevamento di E. coli O157 (compreso H7) devono essere confermati da uno dei seguenti test:
Opzione 1: utilizzando lo standard ISO 16654
Opzione 2: applicando un metodo di conferma che consiste in quanto segue: strisciare 50 μl dell'arricchimento con acqua
peptonata tamponata su una piastra di MacConkey Sorbitol Agar + cefixime e potassio tellurito (CT-SMAC)
(3)
per 24 ± 3 ore a 37 °C. Strisciare le colonie caratteristiche su agar nutriente ed eseguire il test di agglutinazione al lattice
direttamente sulle colonie isolate. Se i risultati dell'Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento di
E. coli O157 (compreso H7) non vengono confermati, eseguire un passaggio di separazione immunomagnetica quindi
strisciare 50 μl su CT-SMAC.
Opzione 3: utilizzando sonde di acido nucleico come descritto nello standard EN ISO 7218
isolate (purificate o meno) da CT-SMAC (vedere opzione 1 o 2). Le sonde di acido nucleico devono essere diverse da quelle
usate nell'Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento di E. coli O157 (compreso H7).
Opzione 4: utilizzando un altro metodo certificato NF VALIDATION, il cui principio deve essere differente da quello
dell'Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento di E. coli O157 (compreso H7). Deve essere usato il
protocollo completo descritto per questo secondo metodo validato. Tutti i passaggi precedenti all'inizio della conferma
devono essere comuni a entrambi i metodi.
Nel caso di risultati discordanti (presunto positivo con il metodo alternativo, non confermato da uno dei mezzi suindicati),
il laboratorio deve agire di conseguenza per garantire la validità dei risultati ottenuti.
Per qualsiasi domanda su applicazioni o procedure specifiche, visitare il nostro sito web all'indirizzo
www.3M.com/foodsafety o contattare il distributore o il rappresentante 3M di zona.
, iniziando dal trasferimento dall'arricchimento primario BPW ISO a uno o più brodi di
(1,2,3)
iniziando dall'arricchimento con acqua peptonata tamponata
(3)
9
(Italiano)
IT
.
(3)
. Incubare
(3)
, con esecuzione su colonie
(5)