3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 115

Lise
1. Deixe que os tubos de 3M Solução de Lise cheguem à temperatura ambiente (20–25 °C), deixando as racks fora
de refrigeração de um dia para o outro (16–18 horas). A alternativa para equilibrar os tubos 3M Solução de Lise à
temperatura ambiente é posicioná-los na bancada do laboratório durante pelo menos 2 horas, incubá-los em uma
incubadora de 37 ± 1 °C por 1 hora ou colocá-los em um aquecedor com bloco seco duplo por 30 segundos a 100 °C.
2. Inverta os tubos com tampa para misturar. Prossiga para a próxima etapa em até 4 horas.
3. Remova o caldo de enriquecimento da incubadora.
4. Um tubo de 3M Solução de Lise é necessário para cada amostra e para a amostra do Controle Negativo (NC)
(meio de enriquecimento esterilizado).
4.1 As tiras de tubos 3M Solução de Lise podem ser cortadas para obter o número desejado de tubos. Selecione
o número de tubos de 3M Solução de Lise individuais ou as tiras de 8 tubos necessárias. Coloque os tubos de
3M Solução de Lise em uma rack vazia.
4.2 Para evitar contaminação cruzada, destampe uma tira de tubo 3M Solução de Lise de cada vez e utilize uma nova
ponteira de pipeta para cada etapa da transferência.
4.3 Transfira a amostra enriquecida para os tubos 3M Solução de Lise conforme descrito abaixo:
Primeiro, transfira cada amostra enriquecida para um tubo 3M Solução de Lise individual. Por último,
transfira o NC.
4.4 Utilize a 3M™ Ferramenta de Tampar/Destampar para Detecção Molecular – Lise para destampar uma tira de
tubos 3M Solução de Lise – uma tira de cada vez.
4.5 Descarte a tampa do tubo de 3M Solução de Lise – se o lisado for mantido para novo teste, coloque as tampas em
um recipiente limpo para reutilização após a lise.
4.5.1 Para processar o lisado mantido, consulte o Apêndice A.
4.6 Transfira 20 µL de amostra para um tubo de 3M Solução de Lise, salvo indicação contrária nas Tabelas de
protocolo 2, 3 e 4.
5. Repita a etapa 4.3 até que todas as amostras individuais tenham sido adicionadas a um tubo 3M Solução de Lise
correspondente na tira.
6. Repita as etapas 4.1 a 4.6, conforme necessário, para o número de amostras a serem testadas.
7. Quando todas as amostras tiverem sido transferidas, transfira 20 µL de NC (meio de enriquecimento estéril,
por exemplo, BPW ISO) para um tubo 3M Solução de Lise. Não use água como um NC.
8. Verifique se a temperatura do 3M Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular está a 100 ± 1 °C.
9. Coloque a rack descoberta de tubos 3M Solução de Lise no 3M Bloco de Aquecimento para Detecção Molecular
e aqueça por 15 ± 1 minutos. Durante o aquecimento, a 3M Solução de Lise mudará da cor rosa (frio) para amarelo
(quente).
Amostras que não foram tratadas com aquecimento de forma adequada durante a etapa de lise do ensaio podem ser
consideradas um risco biológico potencial e NÃO devem ser inseridas no 3M Equipamento de Detecção Molecular.
10. Retire a rack descoberta de tubos 3M Solução de Lise do bloco de aquecimento e deixe esfriar no 3M Bloco
de Resfriamento para Detecção Molecular por pelo menos 5 minutos e no máximo 10 minutos. O 3M Bloco de
Resfriamento para Detecção Molecular, usado em temperatura ambiente sem a 3M Bandeja de Bloco de Resfriamento
para Detecção Molecular, deve ser colocado diretamente sobre a bancada do laboratório. Quando resfriada, a Solução
de Lise voltará à cor rosa.
PT
7
(Português)
20 µl