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3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 20

Molekulare detektion
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6. Charger les tubes recouverts d'un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection
moléculaire 3M propre et décontaminé. Fermer et verrouiller ensuite le couvercle.
7. Examiner et confirmer l'analyse configurée sur le logiciel de détection moléculaire 3M.
8. Cliquer sur l'icône « Démarrer » du logiciel et sélectionner l'instrument à utiliser. Le couvercle de l'appareil sélectionné
s'ouvre automatiquement.
9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M dans l'instrument de détection
moléculaire 3M et fermer le couvercle pour lancer l'analyse. Les résultats sont obtenus en 60 minutes ; toutefois,
les résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.
10. Une fois l'analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire
3M de l'instrument de détection moléculaire 3M et tremper les tubes dans une solution d'eau de Javel à
1-5 % (v:v dans de l'eau) pendant 1 heure, et ce, à l'écart de la zone de préparation des analyses.
AVIS : pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubes
de réactif contenant du DNA amplifié. Cela s'applique au contrôle de réactif 3M, au tube de réactif du kit de
détection moléculaire 2 - E. coli O157 3M (incluant H7) et aux tubes de contrôle de matrice 3M. Toujours éliminer
les tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d'eau de Javel à 1-5 % (v:v dans de l'eau) pendant
1 heure, et ce à l'écart de la zone de préparation des analyses.
Résultats et interprétation
Un algorithme interprète le signal lumineux et la courbe de résultats provenant de la détection de l'amplification de l'acide
nucléique. Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat.
Un résultat positif ou négatif est déterminé par l'analyse d'un nombre de paramètres des courbes individuelles. Les
résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel, tandis que les résultats négatifs ou à vérifier sont affichés à la fin
de l'analyse.
Les résultats présumés positifs doivent être confirmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant la
confirmation de la méthode de référence appropriée
d'enrichissement BPW ISO vers le ou les bouillons d'enrichissement secondaires, puis en effectuant la mise en culture et
la confirmation des isolats à l'aide des méthodes biochimiques et sérologiques appropriées.
REMARQUE : même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à zéro, car le système et les réactifs
d'amplification du kit de détection moléculaire 2 - E. coli O157 3M (incluant H7) effectuent une lecture d'unité relative
de lumière (RLU) « de base ».
Dans le cas peu probable d'un résultat lumineux inhabituel, l'algorithme considérera l'échantillon comme « À vérifier ».
3M recommande à l'utilisateur de recommencer l'analyse pour tout échantillon considéré comme « À vérifier ». Si le
résultat continue à être « À vérifier », passer au test de confirmation en utilisant la méthode de votre choix ou en utilisant
une méthode conforme aux règlementations locales.
En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec le kit de détection moléculaire 2 - E. coli O157 3M (incluant H7),
non confirmé par l'un des moyens décrits ci-dessus, et en particulier pour le test d'agglutination au latex), le laboratoire
doit suivre les procédures nécessaires pour garantir la validité des résultats obtenus.
Confirmation des résultats selon la méthode de certification NF VALIDATION
Dans le cadre de la NF VALIDATION, tous les échantillons identifiés comme positifs par le kit de détection
moléculaire 2 - E. coli O157 3M (incluant H7) doivent être confirmés par l'un des tests suivants :
Option 1 : utilisation de la norme ISO 16654
Option 2 : mise en place d'une méthode de confirmation consistant à effectuer les étapes suivantes : étaler en stries
50 μL d'enrichissement en eau peptonée tamponnée
tellurite de potassium (CT-SMAC)
sur de la gélose nutritive et effectuer un test d'agglutination au latex directement sur les colonies isolées. Si les résultats
du kit de détection moléculaire 2 - E. coli O157 3M (incluant H7) ne sont pas confirmés, effectuer une séparation
immunomagnétique, puis étaler en stries 50 μL sur la gélose CT-SMAC.
, en commençant par effectuer un transfert du premier bouillon
(1,2,3)
en commençant par l'enrichissement en eau peptonée tamponnée
(3)
sur une boîte de gélose MacConkey Sorbitol au céfixime et
(3)
. Incuber pendant 24 ± 3 heures à 37 °C. Étaler en stries les colonies caractéristiques
(3)
20 µL
9
(Français)
FR
.
(3)

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