3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 140

6. Zamknięte korkiem probówki należy umieścić na czystej i odkażonej tacy 3M urządzenia szybkiego ładowania testów
do diagnostyki molekularnej. Następnie zamknąć pokrywę na zatrzask.
7. W oprogramowaniu 3M do diagnostyki molekularnej sprawdzić i potwierdzić konfigurację analizy.
8. Kliknąć przycisk Start w programie i wybrać używane urządzenie. Nastąpi automatyczne otwarcie pokrywy
wybranego urządzenia.
9. Aby rozpocząć analizę, należy umieścić Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
w Urządzeniu 3M do diagnostyki molekularnej i zamknąć pokrywę. Na wyniki trzeba poczekać 60 minut, choć wyniki
dodatnie można uzyskać wcześniej.
10. Po zakończeniu testu należy wyjąć Tacę 3M urządzenia szybkiego ładowania testów do diagnostyki molekularnej
z Urządzenia 3M do diagnostyki molekularnej i zutylizować probówki, namaczając je w 1–5% (obj./obj., wodnym)
roztworze domowego wybielacza przez 1 godzinę i usuwając z obszaru przygotowywania testów.
WAŻNA INFORMACJA: Aby zminimalizować ryzyko otrzymania wyników fałszywie dodatnich w związku
z zanieczyszczeniem krzyżowym, nie należy otwierać probówek reagenta zawierających DNA po amplifikacji.
Dotyczy to Kontroli 3M reagenta, probówki reagentowej Molekularnego testu 3M do wykrywania
2 – E. coli O157 (w tym H7) oraz probówek kontroli 3M macierzy. Zanieczyszczone uszczelnione próbówki
reagentowe należy utylizować, namaczając je w 1–5% (obj./obj.; wodnym) roztworze domowego wybielacza
przez 1 godzinę i wynosząc poza obszar przygotowania testów.
Wyniki i interpretacja
Algorytm interpretuje krzywą strumienia świetlnego powstałego w wyniku wykrycia amplifikacji kwasu nukleinowego.
Oprogramowanie prowadzi automatyczną analizę wyników oraz koduje je odpowiednimi kolorami. Wynik dodatni lub
ujemny określa się przez analizę wielu określonych niepowtarzalnych parametrów krzywej. Domniemane wyniki dodatnie
przekazuje się w czasie rzeczywistym, natomiast wyniki ujemne wyświetlą się po zakończeniu testu.
Domniemane wyniki dodatnie próbek należy potwierdzić zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi
laboratorium lub stosując odpowiednią referencyjną metodę potwierdzającą
podłoża przednamnażającego BPW wg ISO do drugorzędowych bulionów przednamnażających, a następnie wyizolowanie
i potwierdzenie izolatów za pomocą stosownych metod biochemicznych i serologicznych.
UWAGA: Nawet próbka ujemna nie da odczytu zerowego, ponieważ system i odczynniki do amplifikacji Molekularnym
testem 3M do wykrywania 2 – E. coli O157 (w tym H7) charakteryzują się swoistym poziomem tła w RLU.
W rzadkich przypadkach, przy wystąpieniu nietypowego strumienia światła wychodzącego, algorytm opisze je jako
„Sprawdzić". Firma 3M zaleca powtórzenie testów dla wszystkich próbek oznaczonych jako „Sprawdzić". Jeżeli utrzymuje
się wynik „Sprawdzić", należy przejść do testu potwierdzającego z zastosowaniem preferowanej metody lub zgodnie
z lokalnymi przepisami.
W przypadku niezgodności wyników (domniemany wynik dodatni w badaniu Molekularnym testem 3M do wykrywania
2 – E. coli O157 (w tym H7), brak potwierdzenia jedną z powyższych metod, a w szczególności w przypadku testu
aglutynacji lateksowej), laboratorium musi wykonać czynności niezbędne do zapewnienia ważności uzyskanych wyników.
Potwierdzenie wyników zgodnie z certyfikowaną metodą NF VALIDATION
W kontekście walidacji NF VALIDATION wszystkie próbki określone jako dodatnie w badaniu testem 3M Molekularny test
do wykrywania 2 – E. coli O157 (w tym H7) należy potwierdzić, wykonując jeden z następujących testów:
Opcja 1: Zastosowanie normy ISO 16654
wody peptonowej .
(3)
Opcja 2: Wdrożenie metody potwierdzającej, która polega na wykonaniu następujących czynności: Umieścić 50 μl
podłoża przednamnażającego w postaci buforowanej wody peptonowej
z cefiksimem, tellurynem potasu i sorbitolem (CT-SMAC)
Umieścić charakterystyczne kolonie na agarze odżywczym i wykonać test aglutynacji lateksowej bezpośrednio na
wyizolowanych koloniach. Jeżeli wyniki badania Molekularnym testem 3M do wykrywania 2 – E. coli O157 (w tym H7) nie
są potwierdzone, należy wykonać separację immunomagnetyczną, a następnie umieścić 50 μl na CT-SMAC.
20 µL
, począwszy od podłoża przednamnażającego w postaci buforowanej
(3)
. Inkubować przez 24 ± 3 godziny w temperaturze 37°C.
(3)
9
PL
, począwszy od transferu z głównego
(1,2,3)
na płytce agarowej z podłożem MacCockney
(3)
(Polski)