3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 18

Lyse
1. Laisser les tubes de solution de lyse 3M se réchauffer en plaçant le support à température ambiante (20 et 25 °C)
pendant une nuit (16 à 18 heures). Il est également possible d'amener les tubes de solution de lyse 3M à température
ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2 heures, en incubant les tubes de
solution de lyse 3M dans un incubateur à 37 ± 1 °C pendant 1 heure ou en les plaçant dans une unité de traitement
thermique à sec double bloc pendant 30 secondes à 100 °C.
2. Retourner les tubes recouverts d'un bouchon pour les mélanger. Passer à l'étape suivante dans un délai de 4 heures.
3. Retirer le bouillon d'enrichissement de l'incubateur.
4. Un tube de solution de lyse 3M est nécessaire pour chaque échantillon et pour le témoin négatif (NC)
(milieu d'enrichissement stérile).
4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse 3M peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes de
solution de lyse 3M souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de solution de lyse 3M ou de barrettes de 8 tubes
nécessaire. Placer les tubes de solution de lyse 3M dans un portoir vide.
4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de solution de lyse 3M à la fois et utiliser
un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.
4.3 Transférer l'échantillon enrichi dans les tubes de solution de lyse 3M comme indiqué ci-dessous :
Transférer tout d'abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse 3M individuels.
Transférer le NC en dernier.
4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse 3M une à une à l'aide de l'outil d'ouverture/fermeture pour
système de détection moléculaire 3M™ - Lyse.
4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse 3M. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer les bouchons
dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.
4.5.1 Pour le traitement du lysat conservé, voir l'annexe A.
4.6 Transférer 20 µl d'échantillon dans un tube de solution de lyse 3M, sauf indication contraire mentionnée dans
les tableaux de protocole 2, 3 et 4.
5. Répéter l'étape 4.3 jusqu'à ce que chaque échantillon individuel soit ajouté à un tube de solution de lyse
3M correspondant sur la barrette.
6. Répéter les étapes 4.1 à 4.6 en fonction des besoins pour tous les échantillons à analyser.
7. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µL de NC (milieu d'enrichissement stérile, p. ex. BPW ISO) dans
un tube de solution de lyse 3M. Ne pas utiliser d'eau comme NC.
8. Vérifier que la température du support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire 3M est de 100 ± 1 °C.
9. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M dans le support de bloc chauffant pour système de
détection moléculaire 3M et chauffer pendant 15 ± 1 minutes. Lors du chauffage, la solution de lyse 3M passera de rose
(froide) à jaune (chaude).
Les échantillons qui n'ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l'étape de lyse peuvent
être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l'instrument de détection
moléculaire 3M.
10. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M du bloc chauffant et laisser refroidir dans le support de
bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M pendant une durée comprise entre 5 et 10 minutes. Utilisé
à température ambiante sans le plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M, le support
de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M doit être posé directement sur le plan de travail du
laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse retrouvera une couleur rose.
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(Français)
FR
20 µl