3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 29

Lyse
1. Lassen Sie die 3M Lyselösung im Gefäß über Nacht (16–18 Stunden) bei Raumtemperatur (20–25 °C) aufwärmen.
Um die 3M Lyselösungsgefäße auf Raumtemperatur zu erwärmen, können Sie sie für mindestens 2 Stunden auf
die Laborbank stellen, für 1 Stunde bei 37 ± 1 °C inkubieren oder sie für 30 Sekunden bei 100 °C in ein Trocken-
Doppelblock-Heizgerät setzen.
2. Mischen Sie die mit Kappen verschlossenen Gefäße überkopf. Fahren Sie innerhalb von 4 Stunden mit dem nächsten
Schritt fort.
3. Nehmen Sie die Anreicherungsbouillon aus dem Inkubator.
4. Für jede Probe und die Negativkontrolle (NC) (steriles Anreicherungsmedium) wird jeweils ein Gefäß mit
3M Lyselösung benötigt.
4.1 Die 3M Lyselösung-Gefäßstreifen können auf die gewünschte 3M Lyselösung-Anzahl an Gefäßen
zurechtgeschnitten werden. Wählen Sie die Anzahl der erforderlichen 3M Lyselösungsgefäße oder 8er
Gefäßstreifen aus. Setzen Sie die 3M Lyselösungsgefäße in einen leeren Gefäßträger.
4.2 Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, öffnen Sie jeweils nur einen 3M Lyselösungs-Gefäßstreifen und
verwenden Sie bei jeder einzelnen Übertragung eine neue Pipette.
4.3 Übertragen Sie die angereicherte Probe wie unten beschrieben auf die 3M Lyselösungsgefäße:
Übertragen Sie zuerst alle angereicherten Proben jeweils einzeln in ein 3M Lyselösungsgefäß. Übertragen Sie
die NC zuletzt.
4.4 Öffnen Sie jeden 3M Streifen mit Lyselösungsgefäßen einzeln mit dem 3M™ Molekulare Detektion –
Cap/Decap-Werkzeug – Lyse.
4.5 Entsorgen Sie die Kappen der 3M Lyselösungsgefäße. Wenn noch Lysat für weitere Tests übrig bleibt, bewahren
Sie die Kappen in einem sauberen Container auf, um sie nach der Lyse wieder aufzusetzen.
4.5.1 Informationen zur Verarbeitung von nicht verwendetem Lysat finden Sie in Anhang A.
4.6 Übertragen Sie 20 µl Probe in eine 3M Lyselösung, sofern in den Protokolltabellen 2, 3 und 4 nichts anderes
angegeben ist.
5. Wiederholen Sie Schritt 4.3, bis jede einzelne Probe in ein zugeordnetes 3M Lyselösungsgefäß im Streifen
gegeben wurde.
6. Wiederholen Sie bei Bedarf die Schritte 4.1 bis 4.6 bei allen zu prüfenden Proben.
7. Sobald Sie alle Proben übertragen haben, übertragen Sie 20 µl der NC (steriles Anreicherungsmedium, z. B. BPW ISO)
in ein 3M Lyselösungsgefäß. Als NC kein Wasser verwenden.
8. Stellen Sie fest, ob der 3M Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz die erforderliche Temperatur von 100 ± 1 °C
erreicht hat.
9. Stellen Sie den Träger ohne Deckel mit 3M Lyselösungsgefäßen in den 3M Molekulare Detektion – Heizblockeinsatz
und erwärmen Sie ihn 15 Minuten ± 1 Minute lang. Dabei ändert sich die Farbe der 3M Lyselösung von rosafarben (kalt)
zu gelb (heiß).
Proben, die während der Lyse nicht ordnungsgemäß wärmebehandelt wurden, stellen möglicherweise ein biologisches
Risiko dar und sollten NICHT in das 3M Molekulare Detektion – Gerät eingesetzt werden.
10. Nehmen Sie den Träger ohne Deckel mit den 3M Lyselösungsgefäßen aus dem Heizblockeinsatz. Lassen Sie ihn
maximal 5 bis 10 Minuten lang im 3M Molekulare Detektion – Kühlblockeinsatz abkühlen. Der 3M Molekulare
Detektion – Kühlblockeinsatz wird bei Raumtemperatur ohne den 3M Molekulare Detektion – Kühlblockträger
verwendet und sollte direkt auf die Laborbank gesetzt werden. Wenn die Lyselösung abgekühlt ist, nimmt sie wieder
eine rosa Farbe an.
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(Deutsch)
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20 µl