3M E. coli O157 Gebrauchsanweisungen Seite 117

7. Analise e confirme a execução configurada no 3M Software do Sistema de Detecção Molecular.
8. Clique no botão Iniciar do software e selecione o instrumento a utilizar. A tampa do instrumento selecionado
abre automaticamente.
9. Posicione a 3M Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular no 3M Equipamento de Detecção Molecular e
feche a tampa para iniciar o ensaio. Os resultados são fornecidos em 60 minutos, embora os positivos possam ser
detectados ainda mais cedo.
10. Depois que o ensaio estiver concluído, remova a 3M Bandeja de Carga Rápida para Detecção Molecular do
3M Equipamento de Detecção Molecular e descarte os tubos mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v: v em água)
de água sanitária por 1 hora, fora da área de preparação do ensaio.
AVISO: para minimizar o risco de falso-positivos por contaminação cruzada, nunca abra tubos de reagentes
que contenham DNA amplificado. Isso inclui o 3M Controle de Reagentes, 3M Ensaio para Detecção Molecular
2 de E. coli O157 (incluindo H7) e o 3M Tubos de Controle de Matriz. Sempre descarte os tubos de reagentes
selados mergulhando-os em uma solução de 1–5% (v: v em água) de água sanitária por 1 hora, fora da área de
preparação do ensaio.
Resultados e Interpretação
Um algoritmo interpreta a curva de saída de luz que resulta da detecção da amplificação do ácido nucleico. Os resultados
são analisados automaticamente pelo software e são codificados em cores de acordo com o resultado. Um resultado é
determinado positivo ou negativo através da análise de diversos parâmetros exclusivos das curvas. Resultados positivos
presuntivos são relatados em tempo real, enquanto resultados negativos e resultados de inspeção serão exibidos após
a conclusão da execução.
Amostras positivas presuntivas devem ser confirmadas de acordo com os procedimentos operacionais padrão de
laboratório, ou seguindo o método de confirmação de referência apropriado
do enriquecimento primário BPW ISO para o(s) caldo(s) de enriquecimento secundário, seguida pelo plaqueamento
subsequente e a confirmação de isolados usando métodos bioquímicos e sorológicos adequados.
NOTA: até mesmo uma amostra negativa não resultará em leitura zero, uma vez que o sistema e os reagentes de
amplificação do 3M Ensaio para Detecção Molecular 2 de E. coli O157 (incluindo H7) têm uma leitura de unidade de luz
relativa (RLU) em "plano de fundo".
Em casos raros de saída de luz fora do comum, o algoritmo rotula o caso como "Inspecionar". A 3M recomenda que o
usuário repita o ensaio para qualquer amostra Inspecionar. Se o resultado continuar a ser Inspecionar, prossiga com o teste
de confirmação utilizando o método de sua preferência ou conforme especificado pelos regulamentos locais.
Na ocorrência de resultados divergentes (positivo presuntivo com o 3M Ensaio para Detecção Molecular 2 de E. coli O157
(incluindo H7), não confirmados por um dos métodos acima descritos, em particular para o teste de aglutinação em látex),
o laboratório deve seguir as etapas necessárias para garantir a validade dos resultados obtidos.
Confirmação de resultados segundo o método certificado NF VALIDATION
No contexto do NF VALIDATION, todas as amostras identificadas como positivas pelo 3M Ensaio para Detecção
Molecular 2 de E. coli O157 (incluindo H7) devem ser confirmadas por um dos testes seguintes:
Opção 1: uso da norma ISO 16654
Opção 2: implementação de um método de confirmação que consista em: Semear por esgotamento 50 μL do
enriquecimento de água
(3)
potássio (CT-SMAC) . Incubar por 24 ± 3 horas a 37 °C. Semeie colônias características no ágar nutriente e realize um
(3)
teste de aglutinação em látex diretamente nas colônias isoladas. Se os resultados do 3M Ensaio para Detecção Molecular
2 de E. coli O157 (incluindo H7) não forem confirmados, realize uma etapa de separação imunomagnética e então semeie
50 μL na CT-SMAC.
Opção 3: utilização de sondas de ácido nucleico conforme descritas na norma EN ISO 7218
(purificadas ou não) de CT-SMAC (ver Opções 1 ou 2). As sondas de ácido nucleico devem ser diferentes daquelas usadas
no 3M Ensaio para Detecção Molecular 2 de E. coli O157 (incluindo H7).
Opção 4: utilização de algum outro método certificado NF VALIDATION, cujo princípio seja diferente do 3M Ensaio para
Detecção Molecular 2 de E. coli O157 (incluindo H7). Deve ser usado o protocolo completo descrito para esse segundo
método comprovado. Todas as etapas anteriores ao início da confirmação devem ser comuns a ambos os métodos.
Na ocorrência de resultados divergentes (positivo presuntivo com o método alternativo, não confirmado por um dos meios
acima descritos) o laboratório deve seguir as etapas necessárias para garantir a validade dos resultados obtidos.
Em caso de dúvidas sobre aplicações ou procedimentos específicos, acesse nosso site www.3M.com/foodsafety ou entre
em contato com o seu representante ou distribuidor local 3M.
, a partir do enriquecimento de água
(3)
peptonada tamponada em uma placa de ágar MacConkey sorbitol com cefixima e telurito de
PT
, começando com a transferência
(1,2,3)
peptonada tamponada.
(3)
9
(Português)
, em colônias isoladas
(5)