Wbc-Messung; Übersicht - Abbott Cell-Dyn 3200 System Bedienungsanleitung

Allgemeine Systemfunktionen
Flow-Zytometrie

WBC-Messung

Übersicht
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Bei einem Flow-Zytometer werden in der Regel zwei Streuwinkel gemessen. Die
Vorwärtsstreuung dient zur Messung der Zellgröße. Mit der rechtwinkligen
(orthogonalen) Seitenstreuung wird neben der Zelloberfläche und der internen
Struktur vor allem die intrazelluläre Granularität gemessen. Die Kombination der
beiden Streulichtmessungen ermöglicht eine genauere Unterscheidung der Zellpo-
pulationen als die beiden Einzelmessungen für sich genommen. (Abbildung 3.3
zeigt ein Beispiel für das mit dem CELL-DYN 3200 gemessene Streulicht.)
Der optische Kanal dient zur Ermittlung von WBC-Daten. Während der Proben-
ansaugung trennt das Scherventil 20 µl von der Probe für die WBC-Messung ab.
Die WBC-Spritze dispensiert 0,973 ml WBC-Lyse-Reagenz in das Scherventil.
Das Probensegment und das Lyse-Reagenz werden dann in die WBC-Misch-
kammer geleitet, wo sie durch Verwirbelung gemischt werden. Das endgültige
Verdünnungsverhältnis beträgt 1:50.
Durch die Schlauchpumpe für den Probentransfer wird die WBC-Verdünnung aus
der Mischkammer zur Probenzuführung der optischen Durchflussküvette transpor-
tiert. Gleichzeitig wird das im Sheath-Reagenz-Reservoir unter konstantem Druck
stehende Sheath-Reagenz zur Sheath-Reagenz-Zuführung in der optischen Durch-
flussküvette transportiert und in die Küvette abgegeben. Nun gibt die Probendo-
sierspritze 46,5 µl WBC-Verdünnung in den Sheath-Reagenz-Strom ab. Der
Probenstrom wird dann hydrodynamisch fokussiert, damit die Zellen die optische
Durchflussküvette, eine optisch reine Quartzkammer, einzeln hintereinander
passieren. Als Lichtquelle dient ein vertikal polarisierter Helium-Neon-Laser.
Vom Gerät wird folgendes gemessen:
• Beide Arten der Vorwärtsstreuung (1° bis 3° - kurz als 0°-Streuung bezeich-
net - und 7° bis 11°- kurz als 10°-Streuung oder Schmalwinkelstreuung be-
zeichnet)
• Beide Arten der rechtwinkligen (Seitwärts-)Streuung (70° bis 110° - kurz als
90°-Streuung bezeichnet - und 70° bis 110° depolarisiert - kurz als 90°D-
Streuung bezeichnet)
Dieses Verfahren wird als MAPSS™ (Multi Angle Polarized Scatter, Mehrwinkel-
streu-Polarisation) bezeichnet. Es werden verschiedene Kombinationen dieser vier
Messungen verwendet, um die Leukozyten-Subpopulationen zu klassifizieren und
morphologische Markierungen (Flags) zu generieren.
Kapitel 3
CELL-DYN ® 3200 Bedienungsanleitung
68-4284/R4 - Oktober 2002