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Benutzerhandbuch für das BD MAX™ System
Probe
Reagenzien
Lyse und
mischen
Bindung
RNA-Extraktion
Die RNA-Extraktion unterscheidet sich kaum von der DNA-/TNA-Extraktion und ist in
Abbildung 1-2 schematisch dargestellt.
Probenlyse und RNA-Extraktion erfolgen in jedem Einzel-Reagenzstreifen. Die roten Pfeile stellen
die Wärme dar, die das Heizmodul auf das Reaktionsröhrchen überträgt. Das graue und das rote
Feld mit der Beschriftung NS stehen für einen Stabmagneten. Dieser wird durch Anheben und
Senken nah an das Reaktionsröhrchen der einzelnen Einzel-Reagenzstreifen in einem Probenrack
herangeführt.
Das Gerät transferiert ein Festvolumen der vorbereiteten Probe in das Extraktionsröhrchen, um
die Extraktionsreagenzien zu rehydrieren. Anschließend wird das Gemisch in ein Reaktionsröhrchen
transferiert. Das Reaktionsröhrchen wird erwärmt und die Zellen in der Probe werden lysiert,
wobei RNA freigesetzt wird. Die RNA in der Probe wird an die mit einer proprietären RNA-
Affinitätsmatrix beschichteten, magnetischen Perlen gebunden. Der Stabmagnet wird angehoben,
um die an die magnetischen Perlen gebundene Nukleinsäure zu immobilisieren. Der Überstand
wird aus dem Röhrchen aspiriert. Durch Senken des Stabmagnets werden die magnetischen
Perlen freigesetzt. DNase wird in das Röhrchen gegeben, um die im Röhrchen vorhandene DNA
abzubauen. Durch Anheben des Stabmagneten wird die an magnetischen Perlen gebundene
RNA immobilisiert. Der Überstand wird aus dem Röhrchen entfernt und der Magnet wird
abgesenkt. RNA-Waschpuffer wird in das Röhrchen gegeben, um die Perlen zu reinigen. Der
Magnet wird angehoben und der Überstand mit den Zelltrümmern wird entfernt. RNA-
Elutionspuffer wird in das Reaktionsröhrchen gegeben. Dieses wird erhitzt, um gebundene RNA
von den magnetischen Perlen zu lösen. Durch Anheben des Stabmagneten werden die
magnetischen Perlen immobilisiert. Die freigesetzte RNA wird von einem Reaktionsröhrchen in ein
Snap-in Röhrchen transferiert, das sich in Position 3 des Einzel-Reagenzstreifens befindet. Die
RNA ist nun für die PCR-Analyse vorbereitet.
10
Partikel
Perlen
reinigen
aufkonzentrieren
und Überstand
abgießen
Abbildung 1-1 – DNA-/TNA-Extraktion
PCR-bereite
Nukleinsäure
Inkubieren
aus der
mit
Pipette
DNA-/TNA-
Elutionspuffer
DNA/TNA
DNA/TNA in
ein Snap-in
Röhrchen in
Position 3
transferieren
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