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Die Threshold-Linie, auf die in der vergrößerten Ansicht der Wellenlängen als PCR-Grunddatenkurven
zugegriffen werden kann, kann dazu verwendet werden, positive von negativen hintergrundkorrigierten
Amplifikationskurven zu unterscheiden. Bei Verwendung von „Ct am Wendepunkt" wird der Probe nur
dann ein Ct-Wert basierend auf dem Software-Algorithmus zugewiesen, wenn die hintergrundkorrigierte
Amplifikationskurve eine Fluoreszenz am Endpunkt aufweist, die höher ist als der Threshold-Wert. Bei
Verwendung von „Ct am Threshold-Übergang" wird der Probe ein Ct-Wert basierend auf dem Punkt
zugewiesen, an dem die hintergrundkorrigierte Amplifikationskurve die Threshold-Linie schneidet. Bei
Verwendung von „Ct am Threshold-Übergang mit sekundärem QK-Threshold abrufen" wird der Probe
ein Ct-Wert basierend auf dem Punkt zugewiesen, an dem die hintergrundkorrigierte Amplifikationskurve
die Threshold-Linie schneidet, jedoch nur unter der Voraussetzung, dass die Fluoreszenz größer ist
als ein sekundärer QK-Threshold.
Ein Ct-Wert von -1 gibt einen negativen Status an. Ein Ct-Wert von 0 gibt an, dass die Kurve die
Threshold-Linie mehrmals schneidet. Es wird kein Ergebnis ausgegeben. Eine manuelle Überprüfung
der Amplifikationskurven ist erforderlich, damit die Inhouse-Tests den positiven oder negativen Status
ermitteln können.
Threshold und Ct-Berechnung einstellen
1
Die Methode zum Berechnen von Threshold und Ct kann nur für Open System-Tests eingestellt
werden.
2
Wählen Sie mit den Schaltflächen „Wellenlänge" den gewünschten Test und die Wellenlänge
aus. Wählen Sie die Grunddaten aus und klicken Sie auf die Grafik, um sie zu vergrößern.
Aktivieren Sie die Bedienelemente zum Einstellen von Ct-Berechnung und Threshold. Alle
Tests und Wellenlängen müssen gesondert erneut berechnet werden.
3
In der vergrößerten Grafik zeigt das Feld „Threshold" (Mitte rechts in der Grafik) zunächst
„Nicht zutreffend" an. Um die Methode zum Berechnen von Ct zu ändern, klicken Sie auf die
Schaltfläche „Ct-Berechnung"und wählen Sie im Popup-Fenster eine andere Methode aus.
Um den Threshold zu ändern, markieren Sie den Wert im Feld, geben Sie einen neuen
Threshold ein und drücken Sie die Tabulator- oder Eingabetaste oder klicken Sie auf die
Schaltfläche „+" oder „-", um den Wert zu erhöhen oder zu verringern und bewegen Sie die
blaue Threshold-Linie.
4
Um Ct-Werte neu zu berechnen, klicken Sie unten rechts in der Anzeige auf die Schaltfläche
„Threshold anwenden". Die Ct-Werte werden neu berechnet und alle vorhergehenden
Threshold-Linien werden dunkelgrau. Zum Abbrechen der Neuberechnung klicken Sie auf die
Schaltfläche „Threshold abbrechen". Der Threshold kehrt zum vorherigen Wert zurück (oder
zu „Nicht zutreffend", wenn dies die ursprüngliche Neuberechnung ist).
Beachten Sie, dass wenn Sie das Kontrollkästchen „Neu berechnete Cts anwenden?" in der
Quantifizierungsanalyse aktivieren, um Konzentrationen neu zu berechnen, die Threshold-
Linie in der PCR-Analyse ausgegraut angezeigt wird und nicht bewegt werden kann, bis die
Auswahl des Kontrollkästchens „Quantifizierungsanalyse" aufgehoben wird.
5
Wenn der neue Threshold den Ct-Wert, der vom spezifischen Algorithmus berechnet wurde,
ändert, wird der aktualisierte Wert unter dem ursprünglichen Ct-Wert mit der Kennzeichnung
„R" (für „recalculated" – neu berechnet) angezeigt.
4 – Betrieb
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