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6. Wenn das Programm beendet ist, die Mikrotiterplatte aus dem Spülapparat nehmen. Die Platte
sollte weiß aussehen, und es sollte keine rosa Flüssigkeit in den Mikrotiterplatten-Vertiefungen
zurückbleiben.
Manuelles Spülverfahren:
1. Das Nachweisreagenz 1 aus den Vertiefungen entfernen, indem saubere Kimtowels-Wischtücher
oder entsprechende fusselfreie Papiertücher oben auf die Platte gelegt und die Platte vorsichtig
umgedreht wird. Vor dem Umdrehen gewährleisten, dass sich das Papier mit der gesamten
Oberfläche der Platte in Kontakt befindet. Die Platte 1 - 2 Minuten ablaufen lassen. Auf sauberen
Kimtowels-Wischtüchern oder entsprechenden fusselfreien Papiertüchern gut abtupfen. Die
gebrauchten Papiertücher vorsichtig entsorgen, um eine Kontamination der späteren Schritte mit
alkalischer Phosphatase zu vermeiden.
2. Die Platten unter Verwendung des Spülapparates 6 Mal manuell spülen. Jede Vertiefung wird zur
Entfernung von Nachweisreagenz 1 von den Oberseiten der Vertiefungen bis zum Überfließen
gespült. Das Spülen beginnt bei Vertiefung A1 und wird in einer Schlangenlinie nach rechts und
unten fortgesetzt. Nachdem alle Vertiefungen gefüllt wurden, die Flüssigkeit mit einer kräftigen
Bewegung nach unten in den Ausguss dekantieren. Der zweite Spülvorgang beginnt bei
Vertiefung H12 und verläuft in einer Schlangenlinie nach links und oben. Diese aus
2 Spülvorgängen bestehende Sequenz wird zwei weitere Male für insgesamt 6 Spülvorgänge pro
Vertiefung wiederholt.
3. Nach dem Spülen wird die Platte umgedreht auf sauberen Kimtowels-Wischtüchern oder
entsprechenden fusselfreien Papiertüchern abgetupft und 3 bis 4 Mal kräftig ausgeklopft. Die
Papiertücher austauschen und erneut abtupfen. Die Platte umgedreht 5 Minuten ablaufen lassen.
Die Platte nochmals abtupfen.
4. Die Platte sollte weiß aussehen, d. h. es sollte keine restliche rosa Flüssigkeit in den
Mikrotiterplatten-Vertiefungen zurückbleiben.
SIGNALVERSTÄRKUNG
Hinweise:
•
Zur Handhabung des Nachweisreagenzes 2 ein neues Paar Handschuhe verwenden.
•
Zur Vermeidung einer Kontamination von Nachweisreagenz 2 nur die zur Durchführung des
Assays erforderliche Reagenzmenge in den Einweg-Reagenzbehälter aliquotieren. Siehe den
Abschnitt ‚Vorbereitung des Reagenzes'. Das Nachweisreagenz 2 darf nicht in die
Originalflasche zurückgegeben werden. Nach dem Gebrauch nicht aufgebrauchtes
Material verwerfen.
•
Die Zugabe von Nachweisreagenz 2 sollte ohne Unterbrechung erfolgen. Die Inkubationszeit
aller Vertiefungen muss so dicht wie möglich beieinander liegen.
•
Darauf achten, dass die Seiten der Mikrotiterplatten-Vertiefungen nicht berührt werden oder
Reagenz zurück auf die Spitzen gespritzt wird, da eine Kreuzkontamination der Proben
auftreten könnte (siehe Abbildung 1).
1. 75 µl des Nachweisreagenzes 2 unter Verwendung eines 8-Kanal-Dispensers, wie zuvor
beschrieben, sorgfältig in jede Vertiefung der Capture-Mikrotiterplatte pipettieren. Alle
Mikrotiterplatten-Vertiefungen sollten in eine gelbe Farbe umschlagen. Durch Beobachtung der
Intensität der gelben Farbe verifizieren, dass alle Vertiefungen gefüllt wurden. Alle Vertiefungen
sollten eine ähnliche Intensität aufweisen.
2. Die Mikrotiterplatte mit einem Plattendeckel, sauberem Parafilm (oder entsprechendem Material)
abdecken und 15 Minuten bei 20 - 25 °C inkubieren. Direkte Sonnenlichteinwirkung vermeiden.
3. Die Mikrotiterplatte nach 15-minütiger Inkubation (und nicht später als 30 Minuten nach der
Inkubation) im Digene Mikrotiterplatten-Luminometer 2000 (DML 2000 ™) messen.
4. Das Assay-spezifische Software-Protokoll des DML 2000-Instrumentes erlaubt die Eingabe von
relevanten Assayinformationen direkt in die Software.
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