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9. Bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „AUS".
10. Entfernen Sie Konversionsgestell und Abdeckung vom MST Vortexer 2, indem Sie den Hebel mit
rotem Griff anheben.
11. Das Gestell in einem Wasserbad bei 65 ±2°C 15 ±2 Minuten inkubieren. Dabei ist darauf zu achten,
dass der Wasserspiegel im Wasserbad zum Eintauchen des gesamten Probenvolumens in den
Röhrchen ausreichend ist.
12. Nach 15-minütiger Inkubation Gestell mit den Röhrchen aus dem Wasserbad nehmen.
13. Zur Vermeidung von Spritzern überschüssiges Wasser am Gestell abtrocknen, bevor dieses auf den
MST Vortexer 2 gestellt wird.
14. Konversionsgestell und Abdeckung auf dem MST Vortexer 2 wie in Schritt 6 beschrieben befestigen.
15. Vergewissern Sie sich, dass die Geschwindigkeit auf 100 (maximale Geschwindigkeit) eingestellt ist
und bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „EIN". Die Röhrchen 1 Minute vortexen.
16. Bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „AUS"
Hinweis: Bei dem Verfahren mit dem MST Vortexer 2 sind Mischgeschwindigkeit, Zeiten und
Verfahren standardisiert. Daher ist keine visuelle Kontrolle auf Zellpellets erforderlich, wie es beim
manuellen Vortexverfahren der Fall ist.
17. Stellen Sie das Gestell erneut ins Wasserbad und setzen Sie die Denaturierung bei 65 ±2°C 30 ±3
Minuten fort.
18. Gestell aus dem Wasserbad nehmen, abtrocknen und auf dem Vortexer befestigen.
19. Bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „EIN". 10 Sekunden bei maximaler
Geschwindigkeit vortexen.
20. Bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „AUS". Gestell entfernen.
21. Sofort Gestellabdeckung abnehmen und DuraSeal Verschlussfolie von den Proben entfernen.
22. Zur unten beschriebenen Hybridisierung übergehen, oder siehe Optionaler Haltepunkt für die
Lagerung und Behandlung denaturierter Proben.
Vorbereitungsverfahren für SurePath Proben
Nach der zytologischen Analyse können SurePath-Proben bis zu 4 Wochen bei 2-30ºC aufbewahrt
werden.
Nach zytologischem Verfahren folgendermaßen vorgehen:
1.
Sicherstellen, dass Proben auf Raumtemperatur äquilibriert werden und das Flüssigkeitsvolumen ca.
2,8 ml beträgt.
VORSICHT: Wenn die Probe weniger als 1ml Flüssigkeit enthält, ist es möglich, dass nach der
zytologischen Vorbereitung SurePath Preservative Fluid nicht hinzugefügt wurde.
Die Probe ist in dem Fall NICHT geeignet für einen High-Risk HPV DNA-Test.
2. Die Probe im Ausschwingrotor 10 ± 1 Minuten bei 800 ± 15 x g zentrifugieren.
3.
Die Röhrchen aus der Zentrifuge nehmen.
4.
Den Überstand sofort nach der Zentrifugation sorgfältig abdekantieren und Röhrchen vorsichtig
(ungefähr dreimmal) auf absorbierenden, fusselfreien Papiertüchern abtupfen, bis keine Flüssigkeit
mehr aus dem Röhrchen tropft. In jedem Röhrchen sollte ein Pellet zu sehen sein. Das Pellet darf
während des Abtupfens nicht am Röhrchen herabrutschen.
5. Röhrchen in den Halter stellen.
6. Zu jedem Pellet 200 μl hc2 Specimen Transport Medium (STM) mittels eines
Direktverdrängungssystem- oder einstellbaren Dispensers geben.
Hinweis: Röhrchen können ohne Verschlusskappe gemischt werden.
7.
Jedes Röhrchen einzeln auf dem Vortexer 15 Sekunden lang auf der höchsten Geschwindigkeitsstufe
resuspendieren. Wenn sich ein Pellet schwer suspendieren lässt, nochmals 5 - 30 Sekunden oder
solange, bis das Pellet sich vom Röhrchengrund löst, mischen.
8.
In jede Probe mittels eines Direktverdrängungssystem- oder einstellbaren Dispensers 100 μl
vorbereitetes Denaturierungsreagenz (mit Indikatorfarbstoff) pipettieren.
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