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2. 85Die Mikrotiterplatte zur Hybridisierung mit Kalibratoren, Qualitätskontrollen und Proben
vorsichtig aus dem Mikrotiterplatteninkubator I nehmen. Sofort den Plattendeckel abnehmen und
ihn auf eine saubere Oberfläche legen. Als Alternative wird das Mikroröhrchengestell aus dem
Wasserbad genommen. Sofort die Abdeckung von dem Gestell nehmen und die
Plattenabdeckung langsam nach oben vom Gestell abziehen.
3. Mit einem 8-Kanal-Dispenser den gesamten Inhalt (ca. 100 µl) der Kontrollen, Kalibratoren und
Proben aus den Hybridisierungs-Mikrotiterplatten-Vertiefungen oder Mikroröhrchen auf den
Boden der entsprechenden Capture-Mikrotiterplatten-Vertiefung überführen. Für jede überführte
Reihe sind auf dem 8-Kanal-Dispenser neue Pipettenspitzen zu verwenden, und jede
Pipettenspitze muss zur Gewährleistung einer vollständigen Probenüberführung gut auslaufen.
Gegebenenfalls kann der Dispenser ruhig gehalten werden, indem die Mitte der Pipettenspitzen
gegen die obere Kante der Capture-Mikrotiterplatten-Vertiefungen gelehnt wird (siehe
Abbildung 1).
4. Die Mikrotiterplatte mit dem Plattendeckel oder der Plattenabdeckung abdecken und auf dem
Kreisschüttler I bei 1100 ±100 U/min, 60 ± 5 Minuten bei 20 - 25 °C schütteln.
5. Den Waschpuffer vorbereiten. Die Spül und Abwassertanks des automatischen Plattenspülers I
während dieser Inkubation überprüfen. Siehe Abschnitt Vorbereitung der Reagenzien.
6. Wenn der Capture-Schritt abgeschlossen ist, die Capture-Mikrotiterplatte aus dem Kreisschüttler I
nehmen, und den Plattendeckel oder die Plattenabdeckung vorsichtig entfernen. Die Flüssigkeit
aus den Vertiefungen entfernen und sie im Ausguss verwerfen; die Platte über dem Ausguss
umdrehen und mit einer Bewegung kräftig nach unten schütteln. Vorsichtig vorgehen, damit beim
Dekantieren zu dicht am Boden des Ausgusses kein Material verspritzt wird. Die Platte nicht
wieder umdrehen; mit sauberen Kimtowels
Papiertüchern 2 bis 3 Mal kräftig abtupfen. Darauf achten, dass alle Flüssigkeit aus den
Vertiefungen entfernt und die Oberseite der Platte trocken ist.
HYBRIDNACHWEIS
Hinweise:
•
Alle Zugaben über die gesamte Platte mit einem 8-Kanal-Dispenser von links nach rechts
vornehmen.
•
Zwecks Konsistenz der Reagenzabgabe wird die reverse Pipettiertechnik empfohlen. Bei
dieser Technik werden die Pipettenspitzen unter Verwendung des zweiten Anschlags an der
Aspirier-/Abgabekontrolle (Kolben) initial überfüllt. Siehe nachstehendes Verfahren. Die
Spitzen vor Abgabe an die Platte an dem Einweg-Reagenzbehälter abstreifen.
•
Gegebenenfalls kann der Dispenser ruhig gehalten werden, indem man die Mitte der
Pipettenspitzen gegen die obere Kante der Mikrotiterplatten-Vertiefungen lehnt. Darauf
achten, dass die Seiten der Mikrotiterplatten-Vertiefungen nicht berührt werden, weil
andernfalls eine Kreuzkontamination der Proben auftreten könnte. Bitte die vorstehende
Abbildung 1 beachten.
ABBILDUNG 1: RICHTIGES PIPETTIEREN
RICHTIG
Nicht vertikal
pipettieren.
Verspritzen
vermeiden.
®
-Wischtüchern oder entsprechenden fusselfreien
22
Die Spitze darf die
Seite der
Vertiefung nicht
berühren.
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