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MISCHEN UND DENATURIEREN
Manuelles Vortexverfahren
1. Zu jedem Pellet entsprechende Menge STM/DNR-Lösung geben (siehe Tabelle 2). Jedes Röhrchen
wieder verschließen und einzeln auf dem Vortexer mindestens 30 Sekunden lang auf der höchsten
Geschwindigkeitsstufe resuspendieren. Wenn sich ein Pellet schwer suspendieren lässt, nochmals
10 - 30 Sekunden oder solange, bis das Pellet sich vom Röhrchengrund löst, mischen. Wenn sich
das Pellet nach erneutem Mischen (insgesamt maximal 2 Minuten) immer noch nicht ablöst,
Probenkennnummer notieren und zum nächsten Schritt übergehen.
2. Röhrchen in ein Gestell stellen.
3. Gestell 15 ±2 Minuten in ein 65 ±2°C warmes Wasserbad stellen. Dabei ist darauf zu achten, dass
der Wasserspiegel im Wasserbad zum Eintauchen des gesamten Probenvolumens in den Röhrchen
ausreichend ist.
4. Gestell mit Proben aus dem Wasserbad nehmen und Proben einzeln auf dem Vortexer 15 - 30
Sekunden mischen.
Hinweis: Überprüfen, dass zu diesem Zeitpunkt alle Pellets vollständig resuspendiert sind. Proben,
die noch immer sichtbare Pellets aufweisen, sind für den Test ungeeignet und müssen
verworfen werden.
5. Gestell ins 65 ±2°C warme Wasserbad zurückstellen und Denaturierung 30 ±3 Minuten fortsetzen.
6. Zur unten beschriebenen Hybridisierung übergehen oder siehe Optionaler Haltepunkt für die
Aufbewahrung und Behandlung denaturierter Proben.
Vortexer 2-Verfahren mit Multi-Specimen Tubes (MST)
Hinweise:
Das Vortexer 2-Verfahren mit Multi-Specimen Tubes (MST) ist für die Behandlung von Proben in
•
PreservCyt Solution nach dem Zentrifugieren und Abdekantieren des Überstands validiert.
Für die Behandlung von Proben in PreservCyt Solution ist nur der MST Vortexer 2 geeignet. Der Multi-
•
Specimen Tube (MST) Vortexer 1 ist für die Behandlung von Proben in PreservCyt-Lösung
ungeeignet, weil er mit dem Konversionsgestell und der Abdeckung nicht kompatibel ist. Daher darf
das Konversionsgestell nicht mit dem MST Vortexer I benutzt werden.
Das Konversionsgestell und die Abdeckung wurden speziell zur Aufnahme von hc2-
•
Probenkonversionsröhrchen (VWR oder Corning, konische 15-ml-Röhrchen) entwickelt. Der Nutzer
sollte nur einen Röhrchentyp zur selben Zeit verwenden. Andere Marken wurden nicht für den
Gebrauch validiert.
Die spezifizierten Mischzeiten für Konversionsgestell und Abdeckung sind genau einzuhalten.
•
Konversionsgestell und Abdeckung können nicht zum Mischen der Kalibratoren oder
•
Qualitätskontrollen des hc2-DNA-Testkits verwendet werden. Beim Gebrauch von Konversionsgestell
und Abdeckung verhindert die Höhe der STM-Röhrchen das richtige Vortexen.
1. Jedes beschriftete konische 15-ml-Röhrchen abtupfen und dann an seine Position ins
Konversionsgestell stellen.
2. Jedem Pellet das richtige Volumen an STM/DNR-Mischung hinzufügen (Tabelle 2)
3. Die konischen 15-ml-Röhrchen mit DuraSeal Verschlussfolie abdecken, indem die Folie über die
Röhrchen in dem Gestell gezogen wird.
4. Die Gestellabdeckung über die mit Folie abgedeckten Röhrchen bringen und mit den beiden
Seitenclips sicher befestigen. Die Folie mithilfe der Schneidevorrichtung zurechtschneiden, nachdem
die Abdeckung sicher befestigt wurde.
5. Den Hebel mit rotem Griff in die waagerechte Position bringen.
6. Konversionsgestell und Abdeckung auf den MST Vortexer 2 stellen, so dass sich die größte
abgeschrägte Ecke des Konversionsgestells in der vorderen rechten Ecke befindet. Gestell und
Abdeckung so auf der Plattform des MST Vortexer 2 positionieren, dass es sicher in den Schienen
sitzt. Gestell befestigen, indem der Hebel mit rotem Griff nach unten in die senkrechte Position
bewegt wird. Dadurch wird das Gestell festgehalten.
7. Vergewissern Sie sich, dass die Geschwindigkeit auf 100 (maximale Geschwindigkeit) eingestellt ist
und bringen Sie den Kippschalter des Pulsers auf Position „AUS".
8. Bringen Sie den Vortexer-Schalter auf Position „EIN". Die Röhrchen 30 Sekunden vortexen.
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