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2. Darauf achten, dass das Wasserbad auf 65 °C beheizt und der Wasserspiegel zum Eintauchen
des gesamten Volumens in den Probenröhrchen hoch genug ist.
3. Die Proben herausnehmen, und alle erforderlichen Reagenzien vor Beginn des Assays aus
dem Kühlschrank nehmen. Die Reagenzien in 15 bis 30 Minuten auf 20 - 25 °C bringen.
Hinweis: PreservCyt- und SurePath-Proben vorbereiten, bevor bereits denaturierte Proben oder
Kitreagenzien auf Raumtemperatur äquilibriert werden.
4. Mit Hilfe der Digene Hybrid Capture System-Software, Version 2 (DHCS V.2), oder der Digene
Qualitative Software eine Plattenanordnung erstellen. Nähere Einzelheiten zur Erstellung von
Plattenanordnungen sind den entsprechenden Software-Gebrauchsanweisungen zu entnehmen.
5. Zu testende Kalibratoren, Qualitätskontrollen und Proben in der gleichen Reihenfolge, in der sie
getestet werden, in ein Teströhrchengestell bringen. Der Negativkalibrator und der High-Risk-
HPV-Kalibrator sind ZUERST zu testen. Negativkalibrator (NC), High-Risk-HPV-Kalibrator
(HRC), Low-Risk-Qualitätskontrolle (QC1-LR), High-Risk-Qualitätskontrolle (QC2-HR) und
Proben sollten in einer Spalte mit 8-Mikrotiterplatten-Vertiefungen angeordnet laufen. Siehe
Beispielhafte Anordnung nachstehend.
Beispielhafte Anordnung für einen Durchlauf mit 24 Mikrotiterplatten-Vertiefungen:
Reihe
A
B
C
D
E
F
G
H
6. Die NC und der HRC werden in Dreifachbestimmung und die QC1-LR und QC2-HR mit der High-
Risk-HPV-Sondenmischung in Einzelbestimmung getestet. Die Digene-Software bestimmt die
Kalibrator- und Qualitätskontrollpositionen in der Mikrotiterplatte. Zum vorschriftsmäßigen
Kalibrator-/Qualitätskontroll-/Proben-Setup in der Software ist die Gebrauchsanweisung für das
DML 2000 Instrument und die Software, Version 2, sowie das interaktive Bedienerhandbuch für
die Digene Hybrid Capture System, Version 2 (DHCS V.2) bzw. die Gebrauchsanweisung für die
Digene Qualitative Software einzusehen.
DENATURIERUNG
Hinweise:
• Vorsicht: Das Denaturierungsreagenz ist ätzend. Bei der Handhabung vorsichtig vorgehen und
ungepuderte Handschuhe tragen.
• Wichtig: Einige Zervixproben können Blut oder anderes biologisches Material enthalten, welche
nach Zufügen des Denaturierungsreagenzes gegebenenfalls die Farbumschläge maskieren
können. Proben, die vor Zufügen des Denaturierungsreagenzes eine dunkle Farbe aufweisen,
könnten bei diesem Schritt möglicherweise keinen vorschriftsmäßigen Farbumschlag ergeben. In
den Fällen, in denen kein vorschriftsmäßiger Farbumschlag auftritt, werden die Ergebnisse
dieses Assays nicht negativ beeinflusst. Vorschriftsmäßiges Mischen kann durch Beobachtung
des Farbumschlags der Kontrollen und Kalibratoren bestätigt werden.
• Während der Denaturierungs- und Hybridisierungsschritte ist darauf zu achten, dass der
Wasserspiegel im Wasserbad zum Eintauchen des gesamten Probenvolumens in dem Röhrchen
ausreichend ist.
• Die Kalibratoren, Kontrollen und Proben können bis zum Denaturierungsschritt vorbereitet und
über Nacht bei 2 - 8 °C oder bis zu 3 Monate bei -20 °C gelagert werden. Maximal können
3 Gefrier-/Auftauzyklen in maximal 2 Stunden bei Raumtemperatur während jedem Auftauzyklus
durchgeführt werden. Vor Gebrauch gut mischen.
• Nach der Denaturierung und Inkubation werden die Proben nicht mehr als infektiös angesehen.
Das Laborpersonal sollte jedoch jederzeit die nationalen/lokalen Vorsichtsmaßnahmen beachten .
1
NC
Probe 1
NC
Probe 2
NC
Probe 3
HRC
Probe 4
HRC
Probe 5
HRC
Probe 6
QC1-LR
Probe 7
QC2-HR
Probe 8
13
Spalte
2
Probe 9
Probe 10
Probe 11
Probe 12
Probe 13
Probe 14
Probe 15
Probe 16
3
26
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