Agilent Technologies Agilent 1260 Infinity Benutzerhandbuch Seite 82

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Verwendung des Fluoreszenzdetektors
Methodenentwicklung
Diese Schritte müssen für jede Substanz mit einem Fluoreszenzspektrometer
oder unter Stop-Flow-Bedingungen per LC wiederholt werden. Dabei ist für
jede Substanz normalerweise ein eigener Lauf erforderlich. Als Ergebnis
erhalten Sie für jede Substanz einen Satz Anregungs- und Emissionsspektren
(Abbildung 29
es nur bei einer beschränkten Zahl von Substanzen angewendet werden.
Das Agilent LC-System der Serie 1200 Infinity bietet drei verschiedene Verfah-
ren zur Ermittlung vollständiger Fluoreszenzdaten für eine Substanz:
Verfahren I: Führen Sie für eine einzelne Substanz einen Fluoreszenzscan off-
line so durch, wie es für die mobile Phase weiter oben beschrieben wurde. Dies
geschieht am besten mit einer manuellen FLD-Küvette, wenn reine Substanzen
zur Verfügung stehen.
Verfahren II: Führen Sie zwei LC-Läufe mit dem Agilent Fluoreszenzdetektor
der Serie 1260 Infinity durch, um das Substanzgemisch unter bekannten
Bedingungen zu trennen und separate Emissions- und Anregungsspektren auf-
zunehmen.
Verfahren III: Nutzen Sie eine Kombination aus Agilent FLD/DAD der Serie
1200 Infinity und nehmen Sie mit dem DAD in einem Lauf gleichzeitig
UV/Vis-Spektren (äquivalent zu den Anregungsspektren) und mit dem FLD
Emissionsspektren auf.
Verfahren I - Führen Sie einen Fluoreszenzscan durch.
Da mit früheren LC-Fluoreszenzdetektoren Fluoreszenzspektren nicht leicht
zu erfassen waren, wurden Fluoreszenzspektralphotometer zur Ermittlung
der Spektraldaten von unbekannten Substanzen eingesetzt. Mit diesem Ansatz
ist die Optimierung beschränkt, weil verschiedene optische Systeme und sogar
ähnliche Detektoren unterschiedliche Ergebnisse liefern. Diese Unterschiede
können dann zu abweichenden optimalen Anregungs- und Emissionswellen-
längen führen.
Der Agilent Fluoreszenzdetektor der Serie 1260 Infinity bietet die Möglichkeit
eines Fluoreszenzscans, der sämtliche Spektralinformationen liefert, die frü-
her mit einem Standard-Fluoreszenzspektralphotometer ermittelt wurden,
und zwar unabhängig vom LC-Fluoreszenzdetektor.
zeigt die vollständigen Daten für Quinidin, die mit dem Agilent Fluoreszenzde-
tektor der Serie 1260 Infinity und einer manuellen Küvette in einer einzigen
Offline-Messung ermittelt wurden. Die optimalen Anregungs- und Emissions-
wellenlängen können den Koordinaten der Maxima in der dreidimensionalen
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auf Seite 80). Da dieses Verfahren sehr zeitaufwendig ist, kann
Abbildung 31 auf Seite 84
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