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Agilent Technologies ZORBAX Serie Benutzerhandbuch
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Agilent Technologies ZORBAX Serie Benutzerhandbuch

Agilent umkehrphasensäulen
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Column user Guide
for Agilent
Reversed-Phase Columns
Agilent 反相色谱柱用户指南
Guide d'utilisation des colonnes pour les colonnes à phase
inverse Agilent
Säulenbenutzerhandbuch für Agilent Umkehrphasensäulen
Manuale utenti per colonne a fase inversa Agilent
Guía de usuario de columna para columnas de fase reversa
Agilent
Agilent 逆相カラム ユーザーガイド
Руководство пользователя по колонкам для проведения
обращённо-фазной ВЭЖХ Agilent
Guia rápido para as colunas Agilent de fase reversa
ZORBAX reversed-phase / 反相 / à phase reversa / Umkehrphase / Fase inversa /
Fase inversa / 逆相 / Fase reversa / обращённо-фазной
HPLC phases / 相 / Phases HPLC / Phasen / Fasi / Fases /カラム / Fases / фазной
Poroshell 120/300 / Pursuit / Polaris / HC-C18(2) / TC-C18(2)

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Verwandte Anleitungen für Agilent Technologies ZORBAX Serie

Inhaltszusammenfassung für Agilent Technologies ZORBAX Serie

  • Seite 1 Column user Guide for Agilent Reversed-Phase Columns Agilent 反相色谱柱用户指南 Guide d’utilisation des colonnes pour les colonnes à phase inverse Agilent Säulenbenutzerhandbuch für Agilent Umkehrphasensäulen Manuale utenti per colonne a fase inversa Agilent Guía de usuario de columna para columnas de fase reversa Agilent Agilent 逆相カラム...

  • Seite 2: Getting Started

    This booklet provides general information for all ZORBAX, Poroshell, Pursuit, and Polaris reversed-phase columns. For additional detailed information about your specific phase or family, see: agilent.com/chem/columnchoices Getting started A QC Column Performance Report, including a test chromatogram, is enclosed with every Agilent column. The QC test system has been modified from a standard system to minimize system dead volume, so it may vary from the system used in your lab.
  • Seite 3 ENGLISH using Your Column installation • The direction of flow is marked on the column. • 1.8 µm columns (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) can only be operated in the direction flow marked on the column. • Agilent recommends using Polyketone fittings (5042-8957) for columns up to 600 bar, and A-Line Quick Connect assembly (5067-5961 for 0.075 x 105 mm) or Quick Turn Fitting (5067-5966) for columns that will be operated at UHPLC pressures.
  • Seite 4 other operating tips • While generally not harmful to the column, reverse flow should be avoided except to attempt removal of clogged frit (see “column care”). • Always use high purity reagents and chromatography grade solvent to prepare your mobile phase. Degas and filter all mobile phase prior to use.
  • Seite 5 ENGLISH Column operating Parameters: pH and Temperature Phase recommended maximum operating pH range temperature ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 to 9.0 60 °C and C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 and EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2) and TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 to 11.0 60 °C...
  • Seite 6 maximum operating Pressures – Columns up to 9.4 mm id Column type Particle size Pressure limit ZORBAX Rapid Resolution 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 µm 600 bar High Throughput (RRHT) (9000 psi) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 µm 1200 bar High Definition (RRHD)
  • Seite 7 ENGLISH recommended starting Gradients stationary phase usage notes Most reversed-phase 5% methanol or acetonitrile initially and 100% columns methanol or acetonitrile as the final solvent. ZORBAX Eclipse PAH* 30 or 40% acetonitrile initially, to 100% acetonitrile as final solvent. It may be necessary to cool column to 15 to 20 °C for improved resolution.
  • Seite 8 Column Care The inlet frit on columns with a particle size of 2.7 µm or greater has a nominal porosity of 2 µm. Samples that contain particulate matter will plug the column inlet frit. ZORBAX and Fast Guard columns and hardware kits (as required) are recommended for use with such samples, and are gener- ally recommended for all column use.
  • Seite 9 ENGLISH storage recommendations Long-term storage of silica-based, bonded phase columns should be in a pure organic solvent. If the column has previously been used with a buffered mobile phase, the buffer should first be removed by purging the column with 20 to 30 column volumes of a 50:50 mixture of methanol or acetonitrile and water, followed by 20 to 30 column volumes of the pure solvent.
  • Seite 10 Tips for Getting the Best Chromatographic results • Optimize your instrument by minimizing tubing lengths between components, to reduce extra column volume and band broadening. Use 0.12 mm id red tubing for Fast LC/high efficiency columns. Learn about capillary options at agilent.com/chem/lccapillaries • Ensure the data collection rate is optimized for your column.
  • Seite 11 中文 本小册子提供适用于所有 ZORBAX, Poroshell, Pursuit, 和 Polaris 反相色谱柱的一般信息。 有关特定固定相或产品系列的 详细信息，请访问： agilent.com/chem/columnchoices 入门指南 每个 Agilent 色谱柱都附带一个 QC 色谱柱性能报告，该报告 包含一个测试色谱图。QC 测试系统是在标准系统基础上改 装而成的，它具有相对较低的系统死体积，因此，它与实验 室中使用的系统不同。这样可以更好地评估色谱柱并确保获 得更一致的产品。正确配置的 LC 系统将生成与 QC 性能报 告中的色谱图相似的结果。 现代色谱柱都很耐用，在正常的色谱条件下，可以使用很长 时间。在合适的条件下使用可以最大化色谱柱寿命。在应用 方法之前请务必检阅色谱柱使用条件。...
  • Seite 12 使用色谱柱 安装 • 在色谱柱上标明了流向。 • 只能按色谱柱上标记的流向操作 1.8 µm 色谱柱 (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD)。 • 安捷伦建议对最高耐压为 600 bar 的色谱柱使用聚酮接头 (5042-8957), 对将在 UHPLC 压力下操作的色谱柱使用 A-Line Quick Connect 组件 (5067-5961, 0.075 x 105 mm) 或 Quick Turn Fitting 接头 (5067-5966). 请确保订购适用于相应接头的 毛细管连接。如需了解更多信息，请访问 www.agilent.com/chem/a-linefittings. Polyketone fitting, A- Line Quick Connect Quick Turn fitting,...
  • Seite 13 中文 其他操作提示： • 虽然反冲一般不会损坏色谱柱，但还是应避免，除非是 在尝试去除柱前筛板堵塞物时（请参见 “色谱柱维护” ） 。 • 始终使用高纯度试剂和色谱级溶剂来准备流动相。在使 用之前对所有流动相进行脱气和过滤。 • 打开色谱柱会降低色谱柱性能。 • 新色谱柱包含有机溶剂和水的混合物。请参见 QC 性能报 告， 了解色谱柱中的溶剂成分。开始时，应小心不要让任 何可能导致形成沉淀的流动相通过色谱柱。 • Agilent 反相色谱柱与水和所有常见的有机溶剂兼容 • 建议使用预柱来保护色谱柱并延长其使用寿命。 • 在不使用色谱柱时，不能在高的 pH 或高的温度条件 下保存色谱柱。 • 避免在超出建议的色谱柱相应的 pH 范围的条件下使用此 色谱柱（请参见下一页） 。在超出建议的 pH 和温度范围 条件下操作会缩短其使用寿命。 如果您正在使用Poroshell 120 或者ZORBAX RRHT或RRHD色 谱柱，请使用Fast Guard ，访问...
  • Seite 14 色谱柱操作温度：pH 和温度 建议的 pH 键合相 最高操作温度 范围 60 °C ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 至 9.0 和 C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 和 EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18 (2), TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 至 11.0 60 °C ZORBAX Extend C18 pH 2.0 至...
  • Seite 15 中文 最大操作压力 — 内径最大为 9.4 毫米的色谱柱 色谱柱类型 颗粒尺寸 压力限制 ZORBAX 快速分离 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX 快速分离高通量 1.8 µm 600 bar (9000 psi) (RRHT) ZORBAX 快速分离高分辨 1.8 µm 1200 bar (17000 psi) 率 (RRHD) Poroshell 120, Poroshell HPH 2.7 µm, 4 µm 600 bar (Poroshell 120)
  • Seite 16 建议的梯度初始比例 固定相 用法说明 最初为 5% 甲醇或乙腈，100% 甲醇或 大多数反相色谱柱 乙腈作为最终溶剂。 ZORBAX Eclipse PAH* 最初为 30 或 40% 乙腈，至 100% 乙 腈作为最终溶剂。要提高分离度，可 能需要将色谱柱冷却至 15 至 20 °C。 ZORBAX Bonus-RP 与传统的长链烷基固定相相比，化合 物洗脱需要使用浓度较低的有机流动 相改性剂。 大分子色谱柱（如 多肽、蛋白质、DNA 片断等的分离通 Poroshell 300, ZORBAX 常使用三氟醋酸或甲酸改性剂以进行 300SB色谱柱） pH 控制和／或作为离子对添加剂，以 获得所需的保留和选择性。有机缓冲...
  • Seite 17 中文 色谱柱维护 具有颗粒尺寸为 2.7 µm 或更大的色谱柱，它们的进口筛板的 空隙是 2 µm。样品中包含颗粒物将堵塞色谱柱进口筛板。要 使用此类样品，建议使用 ZORBAX 和 Fast Guard 预柱（如果需 要），在使用所有色谱柱时，通常也建议使用这些预柱。 有关保护色谱柱的详细信息，请访问 agilent.com/chem/fastguards 清洁您的色谱柱/延长色谱柱使用寿命 对于可以进行反冲的色谱柱（Poroshell 120、颗粒尺寸大于 1.8 µm 的 ZORBAX 色谱柱和所有 Pursuit 和 Polaris 色谱柱） ， 请用强洗脱度，较小极性的溶剂开始清洗。 1. 断开色谱柱与检测器的连接，然后把柱后废液导入烧 杯。 2. 从你所使用的流动相开始清洗（但必须去除缓冲盐） 。 按 10 到 20 色谱柱体积量注入。 3.
  • Seite 18 存放建议 硅胶基质键合相色谱柱应在纯有机溶剂中进行长期存放。 如果色谱柱已使用了含缓冲盐的流动相，应首先使用甲醇 或乙腈和水的 50:50 混合物对色谱柱进行 20 至 30 个色谱柱 体积的冲洗，然后使用纯溶剂进行 20 至 30 个色谱柱体积的 冲洗。在存放之前，应使用堵头堵住接头，以防止填充物变 干。将色谱柱放在大多数流动相中可安全存放较短时间。为 了保护设备，需要使用不含缓冲液的相同的流动相对色谱柱 进行冲洗，以从仪器和色谱柱中去除盐分（例如， 使用 60:40 ACN/H 0 去除 60:40 ACN/0.02 M 磷酸盐缓冲的流动相） 。在使 用此方法时， 可使用原始流动相快速进行重新平衡， 并消除了被盐分腐蚀的危险。...
  • Seite 19 中文 获得最佳色谱结果的提示 • 尽可能缩短组件之间管线的长度，以减少柱外体积和谱 带扩展，从而优化仪器。对快速 LC/高效色谱柱，请使用 内径为 0.12 毫米的红色管线。有关毛细管选件，请访问 agilent.com/chem/lccapillaries • 确保针对色谱柱优化数据采集速率。对快速 LC 色谱柱 (Poroshell 120, RRHT, RRHD) 使用较高的采集速率。 • 根据样品使用适当的样品过滤或其他样品准备方法。要 了解详细信息，请访问 agilent.com/chem/sampleprep • 在 LC 检测器中使用 Agilent 认证的紫外灯， 以获得最佳性能。...
  • Seite 20 Ce livret fournit des informations générales relatives à toutes les colonnes ZORBAX, Poroshell, Pursuit, et Polaris à phase inverse. Pour obtenir des informations supplémentaires plus détaillées relatives à votre phase ou à votre famille en particulier, visitez le site : agilent.com/chem/columnchoices mise en route Un rapport sur les performances QC des colonnes, comprenant un...
  • Seite 21 FRANÇAIS utilisation de votre colonne installation • La direction du flux est indiquée sur la colonne. • les colonnes 1.8 μm (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) ne peuvent être utilisées que dans la direction du flux indiquée sur la colonne. • Agilent recommande d’utiliser les raccords de colonne en polycétone (5042-8957) pour des pressions jusqu’à...
  • Seite 22 • Du fait de la petite taille des particules, le matériau à l’intérieur des colonnes peut être inhalé lorsqu’il est sec. Les colonnes ne doivent être desserties que dans une zone bien ventilée • Veuillez observer les limites de pression opérationnelle indiquées pour chaque colonne (voir le graphique).
  • Seite 23 FRANÇAIS Paramètres opérationnels de la colonne : pH et température Phase Gamme pH Température recommandée opération-nelle maximum ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 à 9.0 60 °C et C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phényl, Poroshell 120 EC-C18 et EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2), TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 à...
  • Seite 24 Pressions opérationnelles maximales – colonnes jusqu’à 9.4 mm de di Type de colonnes Taille des limite de particules pression ZORBAX Résolution Rapide 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX Résolution Rapide 1.8 µm 600 bar Haut Débit (RRHT) (9000 psi) ZORBAX Résolution Rapide 1.8 µm 1200 bar...
  • Seite 25 FRANÇAIS Gradients de départ recommandés Phase stationnaire remarques d’utilisation La plupart des colonnes à D’abord 5% de méthanol ou d’acétonitrile puis phase inverse 100% de méthanol ou d’acétonitrile comme solvant final. ZORBAX Eclipse PAH* D’abord 30 ou 40% d’acétonitrile, jusqu’à 100% d’acétonitrile comme solvant final.
  • Seite 26 maintenance des colonnes Le fritté intérieur des colonnes dont la taille de particules est de 2.7 μm ou plus a une porosité nominale de 2 μm. Les échantillons qui contiennent des particules obturent le fritté d’entrée de colonne. Les colonnes de garde ZORBAX et Fast Guard avec leur support si nécessaire sont recommandées pour de tels échantillons et sont généralement recommandés pour toutes les colonnes.
  • Seite 27 FRANÇAIS recommandations de stockage Le stockage à long terme des colonnes à phase greffée et à base de silice doit se faire dans un solvant organique pur. En cas d’utilisation préalable de la colonne avec une phase mobile tamponnée, le tampon doit d’abord être éliminé...
  • Seite 28 Conseils d’obtention des meilleurs résultats chromatographiques • Optimisez votre instrument en minimisant les longueurs de tubes entre les différents modules, afin de réduire les volumes “extra-colonne” et l’élargissement de la bande d’échantillon. Utilisez du tube PEEK rouge de 0.12 mm de di pour les colonnes en « Fast LC »/efficacité élevée. Pour en savoir plus sur les différents tubes capillaires disponibles, consultez le site agilent.com/chem/lccapillaries • Vérifiez que la vitesse d’acquisition des données est optimisée pour votre...
  • Seite 29 DEUTSCH Dieses Handbuch enthält allgemeine Informationen zu allen ZORBAX-, Poroshell-, Pursuit- und Polaris- Umkehrphasensäulen. Genauere Informationen über Ihre Säulenphase finden Sie unter: agilent.com/chem/columnchoices erste schritte Zu jeder Agilent Säule gibt es einen QC-Säulentestreport mit Testchromatogramm. Bei dem QC-Testsystem handelt es sich um ein optimiertes Standardsystem, um das Totvolumen im System zu minimieren.
  • Seite 30 Verwenden ihrer säule installation • Die Flussrichtung ist auf der Säule angegeben. • 1.8-μm-Säulen (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) können nur in der auf der Säule angegebene Flussrichtung verwendet werden. • Agilent empfiehlt Polyketon-Fittings (5042-8957) für Säulen bis zu 600 bar und A-Line Quick Connect Einheiten (5067-5961 für 0,075 x 105 mm) oder Quick Turn Fittings (5067-5966) für Säulen, die bei UHPLC-Drücken betrieben werden.
  • Seite 31 DEUTSCH • Halten Sie die spezifischen Säulendruckgrenzwerte für jede Säule ein (siehe Diagramm). Eine Überschreitung dieser Werte beeinträchtigt die Chromatografieleistung und kann gefährlich werden. Weitere Hinweise: • Die Verwendung der Säule entgegen der Flußrichtung sollte vermieden werden, außer bei dem Versuch, verstopfte Fritten zu säubern (siehe “Säulenanwendungshinweise”) • Verwenden Sie für die Vorbereitung der mobilen Phase immer Reagenzien mit hoher Reinheit und Lösungsmittel in...
  • Seite 32 säulenbetriebsparameter: pH-und Temperaturbereiche Phase empfohlener maximale pH-Bereich Betriebs-temperatur ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 bis 9.0 60 °C und C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 und EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2), TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 bis 11.0 60 °C ZORBAX Extend C18 pH 2.0 bis 11.5 60 °C (40 °C bei hohem...
  • Seite 33 DEUTSCH maximaler druck: säulen bis zu 9.4 mm id säulentyp Partikelgröße druckgrenzwert ZORBAX Rapid Resolution 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 µm 600 bar High Throughput (RRHT) (9000 psi) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 µm 1200 bar High Definition (RRHD) (17000 psi) Poroshell 120, Poroshell HPH...
  • Seite 34 empfohlene Anfangsgradienten stationäre Phase Verwendungshinweise Die meisten Am Anfang 5% Methanol oder Acetonitril Umkehrphasensäulen und 100% Methanol oder Acetonitril als Endlösungsmittel. ZORBAX Eclipse PAH* Am Anfang 30 oder 40% Acetonitril, bis 100% Acetonitril als Endlösungsmittel. Für eine bessere Auflösung muss die Säule ggf. auf 15 bis 20 °C heruntergekühlt werden.
  • Seite 35 DEUTSCH säulenanwendungshinweise Die Einlassfritte von Säulen mit einer Partikelgröße von mindestens 2.7 μm hat eine nominale Durchlässigkeit von 2 μm. Proben, die Schwebstoffe enthalten, verstopfen die Einlassfritte der Säule. Für die Verwendung dieser Proben und allgemein werden ZORBAX- und Fast Guard-Vorsäulen sowie Hardwarekits (nach Bedarf) empfohlen.

  • Seite 36: Empfehlungen Zur Lagerung

    Für Säulen mit Partikeln < 1.8 μm sollten Sie keine Rückspülung durchführen, sondern die Säule austauschen. empfehlungen zur lagerung Langfristig sollten Säulen auf Silikabasis mit gebundenen Phasen in einem reinen organischen Lösungsmittel gelagert werden. Wurde die Säule zuvor mit einer mobilen Pufferphase verwendet, sollte der Puffer entfernt werden, indem die Säule mit 20 bis 30 Säulenvolumina eines 50:50-Gemischs aus Methanol oder Acetonitril und Wasser und danach mit 20 bis 30 Säulenvolumina reinem Lösungsmittel gespült wird.
  • Seite 37 DEUTSCH Tipps für optimale Chromatografieergebnisse • Optimieren Sie Ihr Instrument, indem Sie die Längen der Kapillaren zwischen den Komponenten minimieren, um zusätzliches Säulenvolu- men und Bandenverbreiterung zu reduzieren. Verwenden Sie rote Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0.12 mm für Fast-LC-/ Hocheffizienzsäulen.

  • Seite 38: Guida Introduttiva

    Questo manuale fornisce informazioni generali sulle colonne a fase inversa ZORBAX, Poroshell, Pursuit, e Polaris. Per informazioni più dettagliate su una fase specifica o su una serie di prodotti, consultare il sito: agilent.com/chem/columnchoices Guida introduttiva Insieme a tutte le colonne Agilent vengono forniti un certificato di controllo qualità...
  • Seite 39 ITALIANO utilizzo della colonna installazione • Sulla colonna è indicata la direzione del flusso. • Le colonne da 1.8 μm (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) possono essere utilizzate solo nella direzione del flusso indicata. • Agilent raccomanda di utilizzare raccordi in polichetone (cod.
  • Seite 40 • Rispettare i limiti di pressione operativa indicati per ciascuna colonna (v. schema). Superare tali limiti è pericoloso e si rischia di compromettere le prestazioni cromatografiche. Altri consigli per l’utilizzo • Il flusso inverso non è di per sé dannoso per la colonna, dovrebbe tuttavia essere evitato a meno che venga utilizzato per rimuovere un frit intasato (v.”Cura della colonna”).
  • Seite 41 ITALIANO Parametri per il funzionamento della colonna: pH e temperatura Fase Parametro pH max temperatura consigliato operativa ZORBAX Eclipse Plus C18 da pH 2.0 a 9.0 60 °C e C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 e EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2), TC-C18(2) Poroshell HPH da pH 2.0 a 11.0...
  • Seite 42 Pressioni operative massime – Colonne fino a 9,4 mm di id Tipo di colonna dimensione limite particella pressione ZORBAX rapida risoluzione 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX rapida risoluzione 1.8 µm 600 bar elevato rendimento (RRHT) (9000 psi) ZORBAX rapida risoluzione 1.8 µm 1200 bar elevata definizione (RRHD)
  • Seite 43 ITALIANO Gradienti iniziali consigliati Fase stazionaria note di utilizzo Maggior parte delle colonne inizialmente 5% metanolo o acetonitrile e a fase inversa 100% metanolo o acetonitrile come solvente finale. ZORBAX Eclipse PAH* inizialmente 30 o 40% di acetonitrile, fino a 100% di acetonitrile come solvente finale.

  • Seite 44: Pulizia Della Colonna E Prolungamento Della Durata

    Cura della colonna Il frit dell’iniettore sulle colonne con 2.7 μm o più di dimensione della particella ha una porosità nominale di 2 μm. I campioni contenenti particolati vanno ad ostruire il frit dell’iniettore della colonna. Si consiglia l’utilizzo delle precolonne e dei kit specifici ZORBAX e Fast Guard se si impiegano campioni di questo genere.
  • Seite 45 ITALIANO Consigli per lo stoccaggio Si consiglia di conservare le colonne in silice e a fase legata in un solvente organico puro se si intende non utilizzarle a lungo. Se la colonna è stata precedentemente utilizzata con una fase mobile con tampone, rimuovere innanzitutto il tampone spurgando la colonna con 20-30 volumi di una miscela 50:50 di metanolo o acetonitrile e acqua, e poi con 20-30 volumi di solvente puro.
  • Seite 46 Consigli per risultati cromatografici eccellenti • Ottimizzare lo strumento riducendo al minimo la lunghezza dei tubi dei componenti in modo da diminuire il volume extra-colonna e la larghezza di banda. Utilizzare tubi rossi da 0.12 mm di id per colonne Fast LC/elevata efficienza.
  • Seite 47 ESPAÑOL Este folleto ofrece información general para todas las columnas de fase reversa Poroshell, Pursuit, y Polaris. Para obtener más información detallada sobre su fase o familia específica, consulte: agilent.com/chem/columnchoices Procedimientos iniciales Todas las columnas Agilent incluyen un informe de Control de Calidad del rendimiento incluyendo un cromatograma de prueba.
  • Seite 48 utilización de su columna instalación • La dirección de flujo está marcada en la columna. • Las columnas de 1.8 μm (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) solo pueden utilizarse en la dirección de flujo marcado en la columna. • Agilent recomienda usar conectores de policetona (5042-8957) para columnas de hasta 600 bar y un conector de conexión rápida A-Line (5067-5961, para el tamaño de 0,075 x 105 mm) o un conector de giro rápido (5067-5966) para aquellas columnas que vayan a funcionar...
  • Seite 49 ESPAÑOL • Tenga en cuenta los límites de presión de operación indicados para cada columna (ver tabla más adelante). Si se sobrepasan estos límites, el rendimiento cromatográfico se verá afectado y podría no ser seguro. otros consejos de operación • Aunque por lo general no es perjudicial para la columna, se debería evitar el flujo inverso, excepto para intentar desobstruir una frita obstruida (ver “mantenimiento de la columna”).
  • Seite 50 Parámetros de operación de la columna: pH y temperatura Fase intervalo de pH Temperatura máxima recomendado de operación ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 a 9.0 60 °C y C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 y EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2), TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 a 11.0...
  • Seite 51 ESPAÑOL máximas presiones de operación – columnas de hasta 9,4 mm de di Tipo de columna Tamaño de límite de partículas presión ZORBAX de resolución rápida 3.5 µm 400 bares (6000 psi) ZORBAX de resolución rápida 1.8 µm 600 bares alto rendimiento (RRHT) (9000 psi) ZORBAX de resolución rápida...
  • Seite 52 Gradientes de inicio recomendados Fase estacionaria notas de uso Mayoría de las columnas de 5% de metanol o acetonitrilo inicialmente fase reversa y 100% de metanol o acetonitrilo como disolvente final. ZORBAX Eclipse PAH* 30 o 40% de acetonitrilo inicialmente, hasta 100% de acetonitrilo como disolvente final.
  • Seite 53 ESPAÑOL mantenimiento de la columna La frita de entrada en las columnas con un tamaño de partículas de 2.7 μm o superior tiene una porosidad nominal de 2 μm. Las muestras que contienen materia particulada obstruirán la frita de entrada de la columna. Se recomiendan precolumnas ZORBAX y Fast Guard y soportes de precolumnas (según sea necesario) para el uso con estas muestras, y se recomiendan en general para todas las columnas.
  • Seite 54 Para columnas con partículas < 1.8 μm, no invierta el de flujo de la columna, sustituya la columna. recomendaciones de almacenamiento El almacenamiento a largo plazo de las columnas de fase ligada basadas en sílice debe realizarse en un disolvente orgánico puro. Si la columna se ha utilizado previamente con una fase móvil con tampón, primero debe ex- traerse el búfer purgando la columna con 20 a 30 volúmenes de columna de una mezcla 50:50 de metanol o acetonitrilo y agua, seguido de 20 a...
  • Seite 55 ESPAÑOL Consejos para obtener los mejores resultados cromatográficos • Optimice el instrumento minimizando las longitudes de los tubos entre los componentes, para reducir así el volumen extra de la columna y el ensanchamiento de la banda. Utilice tubos rojos de 0.12 mm de di para columnas de LC rápida/alta eficiencia.
  • Seite 56 この冊子には、すべての ZORBAX、 Poroshell、Pursuit、Polaris 逆相カラムに関す る一般情報が記載されています。 お使いの相またはファミリの具体的な詳 細については、下記を参照してくださ い： agilent.com/chem/columnchoices 入門 Agilent のすべてのカラムには、 カラムパフォーマンスレポート （テストクロマトグラムを含む）が付属しています。 テストシ ステムは、システムのデッドボリュームを最小化するために標準 のシステムから変更されているため、現在お使いのシステムとは 異なる可能性があります。これは、カラムの評価を精密化するこ とで、製品の一貫性を向上させるためです。正しくコンフィグレ ーションされたLC システムは、QC パフォーマンスレポートのクロ マトグラムと同様の結果を生成します。 近年のLCカラムは堅牢性が高く、一般的なクロマトグラフィー条件 下で長期間使用できるように設計されています。お客様は、カラ ムを仕様の範囲内で使用することで、カラムのパフォーマンスを 最大にすることが可能です。分析メソッドを最終決定する前に、 カラム仕様を必ず確認してください。...
  • Seite 57 日本語 カラムの使用 据付 • フローの方向はカラム上に記載されています。 • HPLC カラムは、カラムに記された方向のフローでのみ使用で きます。 • アジレントでは、60 MPa (600 bar) までの圧力で使用する カラムにはポリケトンフィッティング (5042-8957) の使 用を推奨します。また、UHPLC の圧力下で使用されるカ ラムには A-Line クイックコネクトアセンブリ (0.075 x 105 mm 用 5067-5961) またはクイックターンフィッティング (5067-5966) の使用を推奨します。お使いのフィッティン グに適したキャピラリー接続を使用してください。 詳しくはホームページをご覧ください。 www.agilent.com/chem/a-linefittings Polyketone fitting, A- Line Quick Connect Quick Turn fitting, p/n 5042-8957 assembly, p/n 5067-5961...
  • Seite 58 • 各カラムに指定された動作圧力の制限値を必ず守ってくださ い（チャートを参照） 。制限値を超えると、カラムが劣化しま そ す。また、継手部分からの液漏れ等、危険が生じたりするお れがあります。 操作に関するその他のヒント • 逆方向のフローは、カラムを損傷することは通常ありません が、フリットの詰まりを取り除く場合を除いて避けることをお 勧めします（「カラムのメンテナンス」を参照） 。 • 移動相の準備には、高純度の試薬と、クロマトグラフィグレー ドの溶媒を必ず使用してください。使用前に必ず移動相の脱気 と濾過を行ってください。 • カラムを分解するとカラムの性能が低下します。 • 新品のカラムには、有機溶媒と水の混合物が入っています。お 使いのカラムの溶媒組成については、QC パフォーマンスレポ ートを参照してください。初めて使用するときには、沈殿を生 じるおそれがある移動相をカラムに通さないように注意してく ださい。 • Agilent 逆相カラムは、水および一般的な有機溶媒が使用でき ます。 • カラムを保護し、カラムの寿命を延ばすため、ガードカラムの 使用を推奨します。 • カラムを保管する際には、高 pH および高温の環境を避けてく ださい。 • このカラムは、必ず推奨されるカラム相 pH 範囲内で使用して ください（次ページを参照）...
  • Seite 59 日本語 カラムの動作パラメータ ： pH および温度 推奨 pH 範囲 相 最高使用 温度 ZORBAX Eclipse Plus C18 60 °C pH 2.0 ～ 9.0 および C8、Eclipse XDB-C8 XDB-C18、XDB-Phenyl、 Poroshell 120 EC-C18 および EC-C8、 ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2), TC-C18(2) Poroshell HPH 60 °C pH 2.0 ～ 11.0 ZORBAX Extend C18 pH 2.0 ～...
  • Seite 60 最大動作圧力－ 内径 9.4 mm 以下のカラム カラムタイプ 粒子径 圧力上限 ZORBAX Rapid Resolution 3.5 µm 400 bar (6000 psi) ZORBAX Rapid Resolution High 1.8 µm 600 bar Throughput (RRHT) (9000 psi) ZORBAX Rapid Resolution High 1.8 µm 1200 bar Definition (RRHD) (17000 psi) 600 bar Poroshell 120 、...
  • Seite 61 日本語 移動相のグラジェントについて 固定相 使用上の注意 最初は 5% メタノールまたはアセトニトリ ほとんどの ル、最終溶媒は 100% メタノールまたはア 逆相カラム セトニトリル。 ZORBAX Eclipse PAH* 最初は 30% または 40% アセトニトリル、 最終溶媒は 100% アセトニトリル。分解能 を向上させるには、必要に応じてカラムを 15 ～ 20 °Cに冷却。 ZORBAX Bonus-RP 化合物の溶離が、従来の長鎖アルキル固定 相に比べて、より低濃度の有機溶媒で可能 な場合もある。 ペプチド、タンパク分析用カ ポリペプチド、タンパク質、DNA 断片など ラム (Poroshell 300、 の分離には、必要なリテンションと選択度...
  • Seite 62 カラムのメンテナンス サンプルに粒子状の物質が含まれる場合、カラムフリットが詰ま ることがあります。このようなサンプルの場合はガードカラムお よびハードウェアキット（必要な場合）の使用が推奨されます。 これは上記の場合に限らずすべてのカラム使用において推奨され ます。 ガードカラムの詳細については、agilent.com/chem/fastguards を参照してください。 カラムのクリーニング ／カラム寿命の向上 バックフラッシュ可能なカラムの場合、強い（極性の小さい）溶 媒を最初に使用します。 1. カラムを検出器から外し、ビーカーに洗浄溶媒を入れます。 2. バッファー塩を含まない移動相（水／有機溶媒）を最初に使用 します。カラム体積の 10 ～ 20 倍の量を通します。 3. 次に、100% の有機溶媒（メタノールまたはアセトニトリル）を 使用します。 4. 圧力が正常に戻ったかどうかを確認し、ます。 5. 4までの手順で圧力が正常に戻らない場合は、カラムを破棄して 新しいカラムを使用します。 粒子径 1.8 μm カラムの場合、カラムのバックフラッシュは行わ ず、カラムを交換してください。...
  • Seite 63 日本語 保管に関する注意事項 シリカベースのカラムを長期間保管するには、純粋な有機溶媒を 入れておく必要があります。カラムをバッファー入りの移動相で 使用した場合は、バッファーを除去するためにカラムをパージす る必要があります。このためには、最初にカラム体積の 20 ～ 30 倍の量のメタノールまたはアセトニトリルと水の 50 ： 50 の混合液を 使用し、次にカラム体積の 20 ～ 30 倍の量の溶媒を使用します。 保管の前に、充填剤の乾燥を避けるため、フィッティングにプラ グをしっかりとはめ込む必要があります。機器を保護するため、 バッファーを含まない同じ移動相でカラムをパージして、機器と カラムから塩を除去することをお勧めします（たとえば、60 ： 40 の ACN／0.02 M リン酸塩バッファー入り移動相を除去するには、 60 ： 40 の ACN／H 0 を使用します） 。この方法では、同じ移動相に より再平衡化時間を短縮でき、塩による腐食も防ぐことができま す。...
  • Seite 64 最適なのクロマトグラフィ結果を得るためのヒント • 機器を最適化するため、コンポーネントの間の配管をできるだ け短くして、余分なカラム体積を減らし、バンドの拡大を避け ます。高速高分離カラムには、内径 0.12 mm の赤い配管を使用 します。キャピラリオプションについては、 agilent.com/chem/lccapillaries を参照してください。 • 使用するカラムに合わせてデータサンプリングレートを最適化 します。高速高分離カラム (Poroshell 120、RRHT、RRHD) の場合 は、サンプリングレートを速くします。 • サンプルに応じて、サンプル濾過やその他の適切なサンプル前 処理を行います。詳細については、 agilent.com/chem/sampleprep を参照してください。 • LC 機器の性能を最大化するため、 Agilent 認定のランプを使用します。...
  • Seite 65 РУССКИЙ В этом буклете приведены общие сведения обо всех колонках обращенной фазы ZORBAX, Pursuit и Polaris. Подробные сведения о применяемой фазе или семействе см. на веб-странице agilent.com/chem/columnchoices Начало работы Все колонки Agilent поставляются с сертификатом качества, содержащим тестовую хроматограмму. Тестовое оборудование, применяемое при кон- троле...
  • Seite 66 Использование колонки Установка • Направление потока указано на колонке. • При работе с колонками на 1.8 мкм (ZORBAX RRHT и ZORBAX RRHD) направление потока должно совпадать с указанным на колонке. • Для колонок с давлением до 600 бар Agilent рекомендует использовать поликетоновые...
  • Seite 67 РУССКИЙ Практические советы • Хотя обычно метод обратной продувки не опасен для колонок, избегайте его применения за исключением очистки закупоренного пористого вкладыша (см. раздел «Обслуживание колонок»). • Всегда используйте для приготовления подвижной фазы реагенты высшей степени очистки и растворитель хроматографической степени чистоты.
  • Seite 68 Рабочие параметры колонок: значения pH и температуры Фаза Рекомендован- Максимальная рабочая ный диапазон температура ZORBAX Eclipse Plus C18 pH от 2.0 до 9.0 60 °C и C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 и EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2) и TC-C18(2) Poroshell HPH pH от...
  • Seite 69 РУССКИЙ Максимальное рабочее давление, колонки с внутренним диаметром до 9,4 мм Тип колонки Размер частиц Предельное давление ZORBAX Rapid Resolution 3.5 мкм 400 бар (6000 psi) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 мкм 600 бар (9000 psi) High Throughput (RRHT) ZORBAX Rapid Resolution 1.8 мкм 1200 бар (17 000 psi) High Definition (RRHD) Poroshell 120, Poroshell 2.7 мкм, 4 мкм...
  • Seite 70 Рекомендованные начальные градиенты Неподвижная фаза Рекомендации по использованию Большинство колонок 5-процентный метанол или ацетонитрил сначала обращенной фазы и 100-процентный метанол или ацетонитрил как окончательный растворитель. ZORBAX Eclipse PAH* 30- или 40-процентный ацетонитрил сначала и 100-процентный ацетонитрил как окончательный растворитель. Для улучшения разрешения...
  • Seite 71 РУССКИЙ Обслуживание колонок В колонках с размером частиц не менее 2.7 мкм используются входные вкла дыши с порами 2 мкм. Пробы, содержащие микрочастицы, могут засорять входные пористые вкладыши. С такими пробами рекомендуется использовать колонки ZORBAX и Fast Guard, а также специальные наборы (при...

  • Seite 72: Рекомендации По Хранению

    Рекомендации по хранению Для долговременного хранения колонок с привитой фазой на основе сили кагеля следует использовать чистый органический растворитель. Если ранее колонка использовалась с буферной подвижной фазой, сначала следует удалить буфер промывкой смесью метанола или ацетонитрила с водой (50:50) с расходом 20-30 объемов...
  • Seite 73 РУССКИЙ Советы для получения лучших результатов хроматографии • Оптимизация установки путем максимального сокращения длины соединительных трубок между частями оборудования, чтобы уменьшить дополнительный объем колонки и размывание пиков. Используйте соединительные трубки красной маркировки с внутренним диаметром 0.12 мм для колонок ВЭЖХ. Подробнее о различных капиллярных трубках: agilent.com/chem/lccapillaries.
  • Seite 74 Este guia oferece informações gerais para todas as colunas de fase reversa ZORBAX, Poroshell, Pursuit e Polaris. Para obter informações mais detalhadas sobre uma fase ou família específica, acesse: agilent.com/chem/columnchoices introdução Cada coluna Agilent traz um relatório de controle de qualidade do desempenho da coluna, incluindo um cromatograma de teste.
  • Seite 75 PORTUGUÊS utilização da coluna instalação • A direção do fluxo é indicada na coluna. • As colunas de 1.8 µm (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) só podem ser operadas na direção do fluxo indicada na coluna. • Agilent recomenda a utilização de conexões de policetona (5042-8957) para colunas de até...
  • Seite 76 • Respeite os limites de pressão de operação indicados para cada coluna (consulte o gráfico). Exceder esses limites compromete o desempenho cromatográfico e pode não ser seguro. outras dicas operacionais • Embora o fluxo reverso geralmente não seja prejudicial à coluna, ele deve ser evitado, exceto ao tentar remover um frit entupido (consulte as exceções na seção "Cuidados com a coluna").
  • Seite 77 PORTUGUÊS Parâmetros operacionais da coluna: pH e temperatura Fase Faixa de pH máxima temperatura recomendada operacional ZORBAX Eclipse Plus C18 pH 2.0 a 9.0 60 °C e C8, Eclipse XDB-C8, XDB-C18, XDB-Phenyl, Poroshell 120 EC-C18 e EC-C8, ZORBAX Bonus-RP, HC-C18(2) e TC-C18(2) Poroshell HPH pH 2.0 a 11.0...
  • Seite 78 máxima pressão operacional: colunas de até 9,4 mm de di Tipo de coluna Tamanho de limite de partícula pressão Colunas de resolução rápida 3.5 µm 400 bar ZORBAX (6.000 psi) Alto rendimento de resolução 1.8 µm 600 bar rápida ZORBAX (RRHT) (9.000 psi) Alta definição de resolução 1.8 µm 1.200 bar rápida ZORBAX (RRHD)
  • Seite 79 PORTUGUÊS Gradientes iniciais recomendados Fase estacionária observações de uso A maioria das colunas de Inicialmente 5% de metanol ou acetonitrila fase reversa e 100% de metanol ou acetonitrila como solvente final. ZORBAX Eclipse PAH* 30% ou 40% de acetonitrila inicialmente até 100% de acetonitrila como solvente final.
  • Seite 80 Cuidados com a coluna O frit de entrada em colunas com um tamanho de partícula de 2.7 µm ou maior tem uma porosidade nominal de 2 µm. As amostras que contêm material particulado obstruirão o frit da entrada da coluna. Com essas amostras, recomenda-se utilizar as colunas ZORBAX e Fast Guard e os kits de hardware (conforme necessário), que também são recomendáveis para uso com todas as colunas.
  • Seite 81 PORTUGUÊS recomendações de armazenamento O armazenamento por longos períodos de colunas à base de sílica ou com fase ligada deve ser realizado em um solvente orgânico puro. Se a coluna foi usada anteriormente com uma fase móvel tamponada, primeiro o tampão deve ser removido purgando a coluna com volumes de 20 a 30 colunas com uma mistura de metanol ou acetonitrila e água a 50:50, seguido de volumes de 20 a 30 colunas de solvente puro.
  • Seite 82 dicas para obter os melhores resultados de cromatografia • Otimize o desempenho do instrumento minimizando os comprimentos da tubulação entre os componentes para reduzir o volume extracoluna e a ampliação da banda. Use a tubulação vermelha com 0.12 mm de diâmetro interno para colunas de LC rápidas/de alta eficiência. Obtenha mais informações sobre opções de capilar em agilent.com/chem/lccapillaries • Assegure-se de que a taxa de coleta de dados esteja otimizada para...

  • Seite 83: Further Information

    Further information For help choosing the right column, request the LC Column Selection Guide or the BioHPLC Column Selection Guide agilent.com/chem/getguides The LC Column and Sample Prep Navigator is a web-based tool that can help you find the right column for your method, based on your input.
  • Seite 84 Learn more at agilent.com/chem/sampleprep This information is subject to change without notice. © Agilent Technologies, Inc. 2014 Printed in Canada, October 6, 2014 820000-999...

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