R-Biopharm RIDAGENE CMV PG9005 Bedienungsanleitung Seite 96

controllo dell'inibizione. Per utilizzare l' Internal Control DNA è necessario utilizzare
10 µl di Internal Control DNA durante l'estrazione.
Per la purificazione con MagNA Pure 96 (Roche), utilizzare 200 µl di plasma e
pipettare 10 µl di Internal Control DNA nella cartuccia di trattamento MagNA Pure
96. Preparare utilizzando il protocollo Pathogen Universal 200. Eluire in 50 µl.
8.2 Isolamento del DNA dalle urine
Per l'isolamento del DNA dalle urine devono essere utilizzati campioni raccolti in
contenitori privi di conservanti secondo le linee guida di laboratorio, e non conservati
e/o trasportati per più di 4 ore a temperatura ambiente (da +18 °C a +25 °C). In
alternativa, i campioni possono essere conservati fino a 3 giorni a una temperatura
compresa fra +2 °C e +8 °C. Le aliquote dei campioni possono essere conservate
fino a 30 giorni a -20 °C. I campioni conservati per più di 30 giorni devono essere
tenuti a -70 °C. Per evitare di scongelare e ricongelare ripetutamente i campioni si
raccomanda di aliquotarli.
®
Il test RIDA GENE CMV contiene un Internal Control DNA che può essere
utilizzato come controllo di estrazione per la preparazione dei campioni e come
controllo dell'inibizione. Per utilizzare l' Internal Control DNA è necessario utilizzare
10 µl di Internal Control DNA durante l'estrazione.
Per la purificazione con Maxwell®RSC (Promega), utilizzare 300 µl di urina e
mescolare con 300 µl di tampone di lisi e 30 µl di proteinasi K. Incubare in
termoshaker a 45 °C per 10 min, quindi trasferire il tutto nella cartuccia Maxwell.
Aggiungere 10 µl di Internal Control DNA . Versare 60 µl di acqua priva di nucleasi
nelle cuvette in dotazione. Sul dispositivo selezionare il protocollo Maxwell® RSC
Viral Total Nucleic Acid.
Per la purificazione con MagNA Pure 96 (Roche), utilizzare 200 µl di urina e pipettare
10 µl di Internal Control DNA nella cartuccia di trattamento MagNA Pure 96.
Preparare utilizzando il protocollo Pathogen Universal 200. Eluire in 50 µl.
9. Esecuzione del test
9.1 Preparazione della PCR mix per la determinazione qualitativa
Per la PCR è necessario calcolare il numero totale di reazioni (campioni e reazioni di
controllo). Ogni volta che viene eseguito il test è necessario includere un controllo
positivo e un controllo negativo.
Pipettare 20 µl della Master Mix in ogni cuvetta di reazione (cuvetta o piastra).
Controllo negativo:
Campione:
96
Dispensare 20 µl di acqua per PCR nella master mix pre-
pipettata come controllo negativo.
Dispensare 20 µl di estratto di DNA alla master mix delle
reazioni campione pre-pipettata.
2019-05-28

RIDA GENE CMV