R-Biopharm RIDAGENE CMV PG9005 Bedienungsanleitung Seite 48

3. Principio del ensayo
®
RIDA GENE CMV es un ensayo de PCR en tiempo real para la detección cualitativa
y cuantitativa directa de citomegalovirus en muestras de plasma (EDTA)
(cuantitativa) y orina (cualitativa) humanas. Tras el aislamiento del ADN, se amplifica
el fragmento génico específico del CMV (MIEA, si está presente).
Las secuencias diana amplificadas se detectan mediante sondas de unión al surco
menor (sondas MGB), unidas en un extremo a un extintor de fluorescencia y en el
otro a un colorante fluorescente indicador (fluoróforo). Las sondas se activan cuando
se hibridan con la secuencia diana. Esta unión además se estabiliza con la unión de
la sonda MGB en el surco menor del ADN de doble cadena. En este punto, el
indicador emite una señal fluorescente que se detecta en la unidad óptica del equipo
de PCR en tiempo real. La señal fluorescente aumenta con la cantidad de
amplicones formados. Para la cuantificación, la señal se compara con las curvas
estándar que se analizan en paralelo, y el resultado se muestra en equivalentes del
genoma/reacción (gEq/reacción). Se usa un factor (gEq/ml) que tiene en cuenta las
diluciones de la extracción del ADN (dependiendo del dispositivo de extracción
usado) y se emplea el método de PCR para determinar el contenido de ADN de la
muestra en equivalentes del genoma/ml (gEq/ml). La conversión a unidades
internacionales/ml (UI/ml) se hace con un factor de corrección (UI/ml) que también
tiene en cuenta la trazabilidad al 1
citomegalovirus humano.
®
El ensayo RIDA GENE CMV contiene un Internal Control DNA (ICD) como control
de preparación de la muestra y para determinar la posible inhibición de la PCR.
4. Reactivos suministrados
Tabla 1: Reactivos suministrados (los reactivos del kit son suficientes para 100
determinaciones).
Código Reactivos
del kit
1
Master Mix
D
Internal Control DNA
P
Positive Control
10^2
Standard A
10^3
Standard B
10^4
Standard C
10^5
Standard D
48
er
estándar internacional de la OMS para el
3
Cantidad
4x
2x
2x
1x
1x
1x
1x
2019-05-28
Color de la tapa
540 µl amarillo
600 µl negro
220 µl azul
220 µl violeta
220 µl violeta
220 µl violeta
220 µl violeta

RIDA GENE CMV