R-Biopharm RIDAGENE CMV PG9005 Bedienungsanleitung Seite 92

3. Principio del test
®
RIDA GENE CMV è un test di PCR real-time per la rivelazione qualitativa e
quantitativa diretta del citomegalovirus in campioni di plasma umano (EDTA)
(quantitativa) e urine (qualitativa). Dopo l'isolamento del DNA, il frammento di gene
specifico per il CMV (MIEA, se presente) viene amplificato.
Le sequenze target amplificate sono rivelate utilizzando sonde MGB (Minor Groove
Binder) collegate su un'estremità al quencher e sull'altra estremità a un colorante
fluorescente (fluoroforo). Le sonde si attivano quando ibridano con la sequenza
target. Il legame viene inoltre stabilizzato dall'unione della sonda MGB nella
scanalatura minore del dsDNA. A questo punto, il reporter emette un segnale
fluorescente che viene rivelato dall'unità ottica dello strumento di PCR real-time. Il
segnale fluorescente aumenta con la quantità di ampliconi formati. Per la
quantificazione, il segnale viene confrontato con le curve standard che si sviluppano
in parallelo ed emesso in genoma equivalenti/reazione (gEq/reazione). Per
determinare il contenuto di DNA del campione in genoma equivalenti/ml (gEq/ml)
viene utilizzato un fattore (gEq/ml) che tiene conto delle diluizioni dell'estrazione del
DNA (a seconda del dispositivo di estrazione utilizzato) e del metodo di PCR. La
conversione in unità internazionali/ml (UI/ml) avviene utilizzando un fattore di
correzione (UI/ml) che tiene anche conto della tracciabilità rispetto al primo standard
internazionale dell'OMS per il citomegalovirus umano.
®
Il test RIDA GENE CMV contiene un Internal Control DNA (ICD) per controllare la
preparazione del campione e la potenziale inibizione della PCR.
4. Contenuto della confezione
Tabella 1: Contenuto della confezione (i reagenti nel kit sono sufficienti per 100
determinazioni).
Codice Reagenti
del kit
1
Master Mix
D
Internal Control DNA
P
Positive Control
10^2
Standard A
10^3
Standard B
10^4
Standard C
10^5
Standard D
92
3
Quantità
4 540 µl
2 600 µl
2 220 µl
1 220 µl
1 220 µl
1 220 µl
1 220 µl
2019-05-28
Colore del coperchio
giallo
nero
blu
viola
viola
viola
viola

RIDA GENE CMV