R-Biopharm RIDAGENE CMV PG9005 Bedienungsanleitung Seite 52

descongelarse inmediatamente antes de la extracción para evitar la degradación del
ácido nucleico.
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El ensayo RIDA GENE CMV contiene un Internal Control DNA (ICD) que puede
utilizarse como control de extracción para la preparación de la muestra y como
control de inhibición simultáneo. Para usar el Internal Control DNA , es necesario
utilizar 10 µl de Internal Control DNA durante la extracción.
Para la purificación con MagNA Pure 96 (Roche), use 200 µl de plasma y pipetee
10 µl de Internal Control DNA en el cartucho de procesamiento de MagNA Pure
96. Prepare con el protocolo Pathogen Universal 200. Eluya en 50 µl.
8.2 Aislamiento del ADN a partir de orina
Para el aislamiento de ADN a partir de orina, deben usarse muestras almacenadas
recogidas en recipientes sin conservadores según los lineamientos del laboratorio y
que no hayan sido almacenadas ni transportadas durante más de 4 horas a
temperatura ambiente (+18 °C a +25 °C). O bien, las muestras pueden almacenarse
durante un máximo de 3 días a una temperatura de +2 °C a +8 °C. Se pueden
almacenar alícuotas de las muestras durante un máximo de 30 días a -20 °C. Las
muestras almacenadas durante más de 30 días deben mantenerse a -70 °C. Se
recomienda preparar alícuotas de las muestras para evitar congelarlas y
descongelarlas repetidamente
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El ensayo RIDA GENE CMV contiene un Internal Control DNA que puede
utilizarse como control de extracción para la preparación de la muestra y como
control de inhibición. Para usar el Internal Control DNA, es necesario utilizar 10 µl
de Internal Control DNA durante la extracción.
Para la purificación con Maxwell® RSC (Promega), use 300 µl de orina y mezcle con
300 µl de búfer de lisado y 30 µl de proteinasa K. Incube en el agitador térmico a
45 °C durante 10 min. Transfiera todo al cartucho Maxwell. Agregar 10 µl de Internal
Control DNA. Vierta 60 µl de agua sin nucleasas en los viales suministrados. En el
dispositivo, seleccione el protocolo "Maxwell® RSC Viral Total Nucleic Acid".
Para la purificación con MagNA Pure 96 (Roche), use 200 µl de orina y pipetee 10 µl
de Internal Control DNA en el cartucho de procesamiento de MagNA Pure 96.
Prepare con el protocolo Pathogen Universal 200. Eluya en 50 µl.
9. Ejecución de la prueba
9.1 Preparación de la mezcla de PCR para la detección cualitativa
Debe calcularse el número total de reacciones (reacciones de muestras y de control)
necesario para la PCR. En cada ensayo debe incluirse un control positivo y uno
negativo.
Pipetee 20 µl de mezcla maestra en cada vial de reacción (vial/placa).
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2019-05-28
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RIDA GENE CMV