R-Biopharm RIDAGENE CMV PG9005 Bedienungsanleitung Seite 75

-70 °C. Il est recommandé de préparer des aliquotes des échantillons pour éviter des
cycles répétés de décongélation/congélation.
®
Le test RIDA GENE CMV contient un Internal Control DNA qui peut être utilisé
comme contrôle de l'extraction pour la préparation des échantillons et comme
contrôle de l'inhibition. L'extraction requiert l'utilisation de 10 µl de Internal Control
DNA .
En cas de purification à l'aide de l'appareil Maxwell® RSC (Promega), utiliser 300 µl
d'urine et mélanger avec 300 µl de tampon de lyse et 30 µl de protéinase K. Incuber
dans l'agitateur chauffant à 45 °C pendant 10 min. Transférer le tout dans la
cartouche Maxwell. Ajouter 10 µl de Internal Control DNA . Verser 60 µl d'eau sans
nucléase dans les flacons fournis. Sur l'appareil, sélectionner le protocole « Maxwell®
RSC Viral Total Nucleic Acid ».
Pour la purification à l'aide de l'appareil MagNA Pure 96 (Roche), utiliser 200 µl
d'urine et pipeter 10 µl de Internal Control DNA dans la cartouche de traitement de
l'appareil MagNA Pure 96. Effectuer la préparation suivant le protocole « Pathogen
Universal 200 ». Éluer dans 50 µl.
9. Réalisation du test
9.1 Préparation du mélange PCR pour la détection qualitative
Calculer le nombre total de réactions (échantillons et réactions de contrôle)
nécessaires à la PCR. Un contrôle positif et un contrôle négatif doivent être inclus à
chaque exécution du test.
Pipeter 20 µl du mélange maître dans chaque flacon de réaction (tube/plaque).
Contrôle négatif :
Échantillon :
Contrôle positif :
Fermer hermétiquement les flacons ou les plaques de réaction, les centrifuger
brièvement à faible vitesse et les transférer vers un dispositif de PCR en temps réel.
Lancer la PCR selon les réglages du dispositif (voir tableau 3).
9.2 Préparation du mélange PCR pour la détection quantitative
Calculer le nombre total de réactions (échantillons et réactions de contrôle)
nécessaires à la PCR. Un contrôle positif et un contrôle négatif doivent être inclus à
chaque exécution du test en plus des étalons.
Pipeter 20 µl du mélange maître dans chaque flacon de réaction (tube/plaque).

RIDA GENE CMV
Ajouter 20 µl d'eau de PCR au mélange maître pré-pipeté
à titre de contrôle négatif.
Ajouter 20 µl d'extrait d'ADN au mélange maître pré-pipeté
de réactions de l'échantillon.
Ajouter 20 µl de Positive Control au mélange maître
pré-pipeté dans le flacon de réaction désigné.
2019-05-28
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