Sartorius Sartobind Rapid A Lab Gebrauchsanleitung Seite 95

Avería
El anticuerpo objetivo
no se ha capturado .
La capacidad de unión
del producto no es sufi-
ciente .
El anticuerpo eluido
tiene una actividad
baja.
Causa
Las condiciones de unión
no son adecuadas .
El anticuerpo tiene una
afinidad baja con la pro-
teína A o no cuenta con
la región Fc. La afinidad
con la proteína A no es
equivalente para anti-
cuerpos de todas las es-
pecies o incluso para al-
gunos subgrupos de an-
ticuerpos dentro de una
especie .
La carga de anticuerpos
es demasiado elevada.
Los anticuerpos y | o con-
taminantes siguen uni-
dos de un ciclo de purifi-
cación anterior .
El producto no se ha al-
macenado correctamen-
te .
Degradación de anti-
cuerpos
Solución
Utilice un ultrafiltro adecuado, p. ej., Vi-
vaflow o Vivaspin , para trasladar la
® ®
muestra al mismo tampón usado para
equilibrar el producto (tampón de equili-
brado). Vuelva a cargar la muestra.
Optimice las condiciones de carga, p. ej.,
aumente el pH del tampón o el tiempo
de permanencia.
Compruebe la afinidad de su anticuerpo
con la proteína A.
Pruebe otra modalidad de cromatografía
diferente (p. ej., IEX).
Para obtener una capacidad de unión
mayor, conecte 2 productos en serie.
Para conectar 2 productos en serie, siga
las instrucciones sobre la conexión del
producto con un microfiltro para prefil-
tración en línea . Como normal general, la
presión se multiplica por dos cuando el
caudal se mantiene constante .
Reduzca la cantidad de carga de la
muestra y ejecute varios ciclos secuen-
cialmente.
Reduzca la concentración de anticuer-
pos en la muestra cargada.
Realice un paso de regeneración de cada
ciclo de purificación .
Asegúrese de seguir las instrucciones de
almacenamiento.
Recoja el eluyente directamente en un
tampón neutralizante.
Para optimizar las condiciones de elu-
ción:
— Aumente el pH del tampón y la fuerza
iónica .
— Incluya aditivos estabilizantes en el
tampón de elución.
Instrucciones de uso de Sartobind
Resolución de problemas
Capítulo,
página
5 .2 .2, 85,
5 .3 .2, 89,
5 .4 .2, 91
5 .2 .3, 87,
5 .3 .3, 90,
5 .4 .3, 93
6, 93,
9 .6, 98
Rapid A Lab
®
95