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Erreur
L'anticorps cible ne se
lie pas .
La capacité de liaison
du produit n'est pas
suffisante .
L'anticorps élué a une
faible activité.
Cause
Les conditions de liaison
ne sont pas adaptées .
L'anticorps a une faible
affinité pour la protéine A
ou n'a pas de région Fc.
L'affinité pour la proté-
ine A n'est pas identique
pour tous les anticorps
d'une espèce ou peut
même varier pour cer-
tains sous-groupes d'an-
ticorps au sein d'une
même espèce.
La charge d'anticorps est
trop élevée.
Les anticorps et | ou les
contaminants sont en-
core liés à un cycle de
purification précédent .
Le produit n'a pas été
stocké correctement.
Dégradation de l'anti-
corps
Remède
Utiliser un ultrafiltre adapté, p. ex. Viva-
flow
ou Vivaspin
, pour transférer
®
®
l'échantillon dans le même tampon que
celui utilisé pour équilibrer le produit
(tampon d'équilibrage). Recharger
l'échantillon .
Optimiser les conditions de chargement,
p. ex. en augmentant le pH du tampon
ou le temps de séjour.
Vérifier l'affinité de l'anticorps pour la
protéine A.
Essayer un autre type de chromatogra-
phie (p. ex. IEX).
Pour obtenir une capacité de liaison plus
élevée, raccorder 2 produits en série.
Pour raccorder 2 produits en série, suivre
les instructions relatives au raccorde-
ment du produit avec un microfiltre pour
la préfiltration en ligne . En règle géné-
rale, la pression double lorsque le débit
reste
constant .
Diminuer la quantité de chargement de
l'échantillon et effectuer plusieurs cycles
de manière séquentielle.
Réduire la concentration d'anticorps
dans l'échantillon chargé .
Effectuer une étape de régénération
après chaque cycle de purification.
S'assurer de respecter les instructions de
stockage.
Collecter l'éluant directement dans un
tampon neutralisant.
Pour optimiser les conditions d'élution :
— Augmenter le pH et la force ionique
du tampon.
— Inclure des additifs stabilisants dans
le tampon d'élution.
Manuel d'utilisation Sartobind
Élimination des erreurs
Chapitre,
page
5 .2 .2, 61,
5 .3 .2, 64,
5 .4 .2, 67
5 .2 .3, 63,
5 .3 .3, 66,
5 .4 .3, 69
6, 69,
9 .6, 74
Rapid A Lab
®
71
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