Sapphire CD-ROM Bedienungsanleitung Seite 1088

Kapitel 13
Methoden
Monoklonale Antikörper
Fluoreszenz
Streulicht
CELL-DYN Sapphire TM Bedienungsanleitung
56-0302/R1—Juni 2005
Allgemeine Systemfunktionen
Der CD61 Assay basiert auf Methoden, bei denen monoklonale Anti-
körper, Fluoreszenz- und Streulichttechnik zur Anwendung kommen.
Monoklonale Antikörper werden von einer Zelle gebildet, wenn eine
Tumorzelle (die aus einer sich unbegrenzt vermehrenden Zelllinie
stammt) mit einer Zelle fusioniert wird, die einen bestimmten Antikörper
produziert. Die daraus entstandene Zelle, die als Hybridomzelle
bezeichnet wird, weist zwei entscheidende Eigenschaften auf: Sie
vermehrt sich unbegrenzt und produziert den gewünschten Antikörper.
Da die Zellen in Kultur gezüchtet werden können, liefern sie große
Mengen des einzelnen Antikörpers.
Antikörper binden mit extrem hoher Spezifität an ein einzelnes Antigen.
Eine antikörperproduzierende Zelle lässt sich demnach dadurch selek-
tieren, dass der von ihr produzierte monoklonale Antikörper das
gewünschte Antigen bindet. Die Auswahl der antikörperproduzierenden
Zelle, die zur Produktion des monoklonalen Antikörpers für den CD61
Assay verwendet wird, erfolgte aufgrund der Fähigkeit des Antikörpers,
an das CD61-Antigen (das gpIIIa-Protein des gpIIb/IIIa-Komplexes) zu
binden, das auf humanen Thrombozyten vorkommt.
Die Bezeichnung der monoklonalen Antikörper basiert auf der CD-
Nomenklatur (CD - Cluster Designation). So trägt der für den CD61
Assay verwendete mAk die Bezeichnung Anti-human-CD61.
Die Messung mittels monoklonaler Antikörper ist durch kovalente Kopp-
lung eines Fluoreszenzfarbstoffs an die Antikörper möglich. Für den
CD61 Assay wird der Farbstoff Fluoreszeinisothiocyanat (FITC) genutzt.
Bei Anregung mit einer Wellenlänge von 488 nm liegt der Zentralbereich
seiner Fluoreszenz nahe 530 nm, der Wellenlänge, bei der der für die Reti-
kulozytenmessung des CELL-DYN Sapphire Systems verwendete Farb-
stoff seinen Peak erreicht. Aufgrund dieser Gemeinsamkeit ist es
möglich, den CD61 Assay zeitgleich mit der Retikulozytenmessung im
optischen FL1-Subsystem durchzuführen.
Der CD61 Assay basiert darüber hinaus auf der Streulichttechnik. Die
7°- und 90°-Streulichtmessungen werden, wie im folgenden Abschnitt
beschrieben, von Algorithmen unter Berücksichtigung der Fluoreszenz-
messungen verarbeitet.
CELL-DYN ImmunoPlt™ (CD61) Assay
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