Streulicht - Sapphire CD-ROM Bedienungsanleitung

CELL-DYN Immuno T-Zell (CD3/4/8) Assay
Allgemeine Systemfunktionen
Fluoreszenz

Streulicht

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Die bei diesem Assay verwendeten Antikörper binden nur auf folgende
Weise an spezifische Antigene:
• Der Anti-CD3 Antikörper reagiert mit einem CD3-Antigen, das nur
auf T-Zellen exprimiert ist. Bei 61-85 % der Blutlymphozyten
handelt es sich um T-Zellen.
• Der Anti-CD4 Antikörper reagiert mit einem CD4-Antigen, das auf
T-Helfer-/Induktorzellen sowie auf Monozyten (in geringer Dichte)
exprimiert ist. Bei ungefähr 28-58 % der Blutlymphozyten handelt
es sich um T-Helfer/Induktorzellen.
• Der Anti-CD8 Antikörper reagiert mit einem CD8-Antigen, das auf
T-zytotoxischen/-Suppressorzellen sowie auf einer Subklasse der
natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) exprimiert ist. Bei 19-48 %
der Blutlymphozyten handelt es sich um T-zytotoxische/-Suppres-
sorzellen. 1
Die Messung mittels monoklonaler Antikörper wird durch kovalente
Kopplung eines Fluoreszenzfarbstoffs an die Antikörper möglich. Für den
T-Zell-Assay werden die Farbstoffe Fluoreszeinisothiocyanat (FITC) und
Phycoerythrin (PE) verwendet. Bei Anregung mit einer Wellenlänge von
488 nm liegt der Zentralbereich der Fluoreszenz bei beiden Farbstoffen
bei folgenden Wellenlängen:
• FITC: 530 nm
• PE: 570 nm
Der Zentralbereich der FITC-Fluoreszenz liegt nahe 530 nm, der Wellen-
länge, bei der der für die Retikulozytenmessung des CELL-DYN
Sapphire Systems verwendete Farbstoff seinen Peak erreicht. Aufgrund
dieser Gemeinsamkeit ist es möglich, den T-Zell-Assay zeitgleich mit der
Retikulozytenmessung im optischen FL1-Subsystem durchzuführen. Das
optische FL2-Subsystem wird zum Messen der PE-Fluoreszenz
verwendet.
Das FL3 optische Subsystem wird zur Beurteilung der Eignung der
Lymphozyten verwendet. Lymphozyten mit FL3 Fluoreszenzmessungen
unter einer bestimmten Konzentration werden als geeignet angesehen.
Der T-Zell-Assay basiert darüber hinaus auf der Streulichttechnik. Die 0°-
Lichtverlust- und die 7°-Streulichtmessungen werden, wie im folgenden
Abschnitt beschrieben, von Algorithmen unter Berücksichtigung der
Fluoreszenzmessungen verarbeitet.
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CELL-DYN Sapphire TM Bedienungsanleitung
56-0302/R1—Juni 2005
Kapitel 12