immuno concepts Colorzyme ANA Für Professionellen Gebrauch Seite 38

COLORZYME® ANA TESTPROCEDUR
1. REKONSTITUERA BUFFERT (PBS)
Lös upp innehållet i en buffertpåse i en liter av-
joniserat eller destillerat vatten. PBS-bufferten kan
täckas och förvaras i 2-10° C i högst fyra veckor.
REKONSTITUERA FÄRGREAGENS
2.
Lös upp innehållet i en påse i 150 ml avjoniserat
eller destillerat vatten. Blanda väl tills preparatet
har lösts upp helt och hållet. Denna färgreagens
är stabil i 30 dagar i rumstemperatur i stängd be-
hållare. Färgreagensen kan återanvändas i högst
30 dagar, eller tills det syns någon färgförändring
eller fällning. Grumling eller opalescens utan synlig
fällning vid återanvändning är normalt. Beroende
på användningstakten kan 150 ml Colorzyme®
färgreagens användas med maximalt tjugo
objektglas.
SPÄD PATIENTPROV
3.
Screening: Späd patientprovet till 1:40 genom att
tillsätta 0,05 ml (50 µl) serum till 1,95 ml rekon-
stituerad PBS.
Semikvantitativ bestämning av antikroppnivå: Gör
seriespädningar av screeningprov (t ex 1:80, 1:
160, 1:320...1:2560) med användande av PBS.
FRAMSTÄLL SUBSTRATOBJEKTGLAS (20-25 µl/brunn)
4.
Tag bort objektglaset(en) från påsen(-arna) och
placera kontrollserat på kontrollbrunnarna enligt
följande: Vänd upp och ned på pipettflaskan och
kläm försiktigt tills det syns en droppe på spetsen.
För försiktigt droppen mot rätt kontrollbrunn, men
undvik direktkontakt mellan pipettspetsen och
objektglasets yta. Placera den positiva kontrollen
i den brunn som är märkt "+", den negativa
kontrollen i den brunn som är märkt "-" och en
droppe PBS-buffert i den brunn som är märkt
"PBS". Tillsätt 1 droppe (20-25 µl) patientprov i de
numrerade brunnarna.
OBSERVERA: För allmän screening rekommen-
deras den homogena positiva kontrollen. För
semikvantitativ bestämning av antikroppnivå skall
den positiva kontroll väljas som åskådliggör det
färgningsmönster som är mest likt screeningprovet
(använd t ex den fläckiga positiva kontrollen för
patientprover som ger ett fläckigt färgningsmön-
ster i screening).
VARNING: DIREKTKONTAKT MELLAN PIPETTSPETSEN
OCH OBJEKTGLASETS YTA KAN LEDA TILL ATT ANTI-
GENSUBSTRATET TAR SKADA.
5. ODLING AV OBJEKTGLASET (30±5 minuter i rums-
temperatur, det vill säga 18-24 °C)
Placera objektglaset(en) i en fuktig täckt kam-
mare (en petriskål med fuktad pappershandduk
duger). Odla, med locket på, i 30 minuter (±5
minuter) i rumstemperatur (18-24 °C).
6. PBS-SKÖLJNING
Avlägsna objektglaset/-n från inkubatorbrickan
och skölj hastigt med PBS med sprutflaska, Pasteur
eller serologisk pipett. Spruta inte buffert direkt på
brunnarna.
OBSERVERA: För att undvika att objektglasen
korskontamineras kan du leda PBS-strålen längs
objektglasets mittlinje genom att först luta ob-
jektglasen mot den övre raden av brunnar och
därefter mot den nedre raden.
7. PBS-TVÄTTNING (10 minuter)
Tvätta objektglaset/-n i tio minuter med PBS i en
objektglasfärgskål eller ett Coplin-kärl. Försiktig
omskakning rekommenderas vid nedsänkning,
mittpunkt och avlägsnande av objektglaset.
Denna tvättning kan förlängas i 10-30 minuter
utan att de slutliga testresultaten påverkas.
Kassera PBS-tvättlösningen efter användning. För
optimala resultat skall PBS ändras vid mittpunkten
och en magnetisk blandare användas.
ENZYMEANTIKROPPREAGENS (Täck brunnarna
8.
med12-14 droppar)
Avlägsna ett objektglas åt gången från PBS och
doppa det 3-5 gånger i avjoniserat eller destillerat
vatten.Knacka objektglasets sida mot ett läskpap-
per eller en pappershandduk för att avlägsna
överskottsvatten.Återför genast objektglaset till
inkubationskammaren och täck brunnarna helt
med enzymantikroppreagens. Börja med att
placera en droppe över varje brunn.Upprepa
detta för varje objektglas.Enzymantikropprea
gensen har titrerats för att kompensera för det
avjoniserade eller destillerade vatten som är kvar
på objektglaset efter sköljning.
OBSERVERA: Det är viktigt att objektglasbrunnarna
inte torkar under detta förfarande, annars tar
substratet skada.
TORKA ALDRIG OBJEKTGLASET MED LÄSKPAPPER
ELLER ANNAT FÖREMÅL OCH LÅT ALDRIG OBJEK-
TGLASET STÅ UTAN ENZYMANTIKROPPREAGENS
LÄNGRE ÄN 15 SEKUNDER.
ODLA OBJEKTGLASET (30±5 minuter i rumstempera-
9.
tur, det vill säga 18-24 °C)
Placera locket på inkubationskammaren och
odla objektglaset/-n i 30 minuter (±5 minuter) i
rumstemperatur (18-24 °C).
PBS SKÖLJNING
10.
Avlägsna objektglaset/-n från inkubatorbrickan
och skölj hastigt med PBS. Spruta inte buffert
direkt på brunnarna.
PBS-TVÄTTNING (10 minuter)
11.
Tvätta objektglaset/-n i tio minuter med PBS i en
objektglasfärgskål eller ett Coplin-kärl. Försiktig
omskakning rekommenderas vid nedsänkning,
mittpunkt och avlägsnande av objektglaset.
Denna tvättning kan förlängas med 10-30 minuter
utan att de slutliga testresultaten påverkas.
ODLA FÄRGREAGENSEN (30 minuter i rumstem-
12.
peratur, det vill säga 18-24 °C).
Avlägsna ett objektglas åt gången från PBS och
doppa det 3-5 gånger i avjoniserat eller destillerat
vatten. Knacka därefter objektglasets sida mot
ett läskpapper eller en pappershandduk för att
avlägsna överskottsvatten. Placera omedelbart
objektglaset(n) i ett Coplin-kärl med aktiverad
färgreagens och odla i 30 minuter.
13. PBS-SKÖLJNING
Avlägsna ett objektglas åt gången från Coplin-
kärlet och skölj varje sida på objektglaset i 4-5
sekunder med PBS. Spruta inte buffert direkt på
brunnarna. Placera varje PBS-sköljt objektglas i
ett Coplin-kärl fyllt med avjoniserat eller destillerat
vatten tills alla objektglas har avlägsnats från
färgreagensen. Fortsätt omedelbart med steg 14.
14. MONTERING AV SKYDDSREMSA
Avlägsna ett objektglas åt gången från det av-
joniserade eller destillerade vattnet och knacka
objektglasets sida mot ett läskpapper eller en
pappershandduk för att avlägsna överskottsvat-
ten. TORKA ALDRIG OBJEKTGLASET MED LÄSKPAP-
PER ELLER ANNAT FÖREMÅL OCH LÅT ALDRIG
OBJEKTGLASET STÅ UTAN SKYDDSREMSA LÄNGRE
ÄN 15 SEKUNDER. Tillsätt 4-5 droppar halvperma-
nent monteringsmedium längs mittlinjen på varje
objektglas. Sätt försiktigt skyddsremsan på plats
och undvik luftfickor genom att försiktigt lägga
ned skyddsremsan från ena änden av objektgla-
set till den andra.
OBSERVERA: För många monteringsmedia på
objektglaset kan leda till att cellerna inte får en
klar upplösning (otydlig bild). Överflödigt mon-
teringsmedium kan avlägsnas från objektglaset
genom att skyddsremsan försiktigt torkas med
läskpapper eller linspapper. Undvik att röra direkt
vid skyddsremsan. Objektglaset kan avläsas direkt
eller förvaras under en längre tid i 2-10° C utan att
förlora reaktivitet.
TEKNISK HJALP: +1-916- 363-2649
eller e-mail: techservice@immunoconcepts.com
38