immuno concepts Colorzyme ANA Für Professionellen Gebrauch Seite 20

IN COLORZYME® DEGLI ANA
1. RICOSTITUZIONE DEL TAMPONE (PBS)
Sciogliere il contenuto di una busta di tampone
in un litro di acqua deionizzata o distillata. Il
tampone PBS può essere coperto e conservato a
2-10°C fino a quattro settimane.
2. RICOSTITUZIONE DEL REAGENTE COLORATO
Mescolare bene fino al completo dissolvimento.
Questo reagente colorato è stabile per 30 giorni a
temperatura ambiente in un contenitore chiuso.
Questo reagente colorato può essere riutilizzato
fino a 30 giorni o fino a che è visibile un cambia-
mento di colore o un precipitato. Torbidezza o
opalescenza, senza alcun precipitato visibile al
momento del riutilizzo, sono normali. A seconda
della frequenza d'uso, è possibile utilizzare fino
a venti vetrini con 150 ml di reagente colorato
Colorzyme®.
DILUIZIONE DEI CAMPIONI DEI PAZIENTI
3.
Screening: diluire i campioni dei pazienti a 1:40
aggiungendo 0,05 ml (50 µl) di siero a 1,95 ml di
PBS ricostituito.
Titolo semi-quantitativo: fare delle diluizioni seriali
del/i campione/i dello screening (ad es. 1,80,
1,160, 1,320...1:2560) usando il PBS.
PREPARAZIONE DEI VETRINI DEL SUBSTRATO
4.
(20-25 µl/pozzetto)
Rimuovere il/i vetrino/i dal contenitore/i e porre
i sieri di controllo sui pozzetti di controllo come
descritto di seguito. Capovolgere il flacone con-
tagocce di controllo e premere delicatamente
fino a che in punta è visibile la goccia. Appog-
giare delicatamente la goccia sul pozzetto di
controllo appropriato evitando il contatto diretto
della punta del contagocce con la superficie del
vetrino. Mettere il controllo positivo sul pozzetto
marcato "+", il controllo negativo sul pozzetto
marcato "-" e una goccia di tampone PBS sul
pozzetto marcato "PBS". Aggiungere 1 goccia
(20-25 µl) di campione del paziente ai pozzetti
numerati.
NOTA: per uno screening generale, si rac-
comanda il controllo positivo omogeneo. Per
titolazione semi-quantitativa scegliere il controllo
positivo che mostra il pattern di colorazione più
simile al campione dello screening (ad es., per un
campione del paziente che nello screening dà un
pattern di colorazione a chiazze, usare il controllo
positivo a chiazze).
ATTENZIONE: IL CONTATTO DIRETTO DELLA PUNTA
DEL CONTAGOCCE CON LA SUPERFICIE DEL
VETRINO PUÒ DANNEGGIARE IL SUBSTRATO ANTI-
GENE.
5. INCUBAZIONE DEI VETRINI (30±5 minuti a tempera-
tura ambiente, ovvero 18-24°C)
Mettere il/i vetrino/i in una camera umida, cop-
erta (una capsula di Petri con carta assorbente
inumidita andrà bene). Incubare, col coperchio,
per 30 minuti (±5 minuti) a temperatura ambiente
(18-24°C).
6. RISCIACQUO CON PBS
Rimuovere il/i vetrino/i dal piatto dell'incubatore
e sciacquare brevemente con PBS usando una
bottiglia a zampillo, una pipetta di Pasteur o una
pipetta sierologica. Non far zampillare il tampone
direttamente sui pozzetti.
NOTA: per evitare la contaminazione incrociata
sui vetrini, orientare il flusso di PBS lungo la linea
mediana del vetrino, inclinandolo prima verso
la fila di pozzetti superiore e poi verso quella
inferiore.
7. LAVAGGIO COL PBS (10 minuti)
Lavare il/i vetrino/i per 10 minuti con PBS in
un piatto per la colorazione del vetrino o una
vaschetta Coplin. Si raccomanda di agitare con
delicatezza all'immersione del vetrino, al punto
mediano e alla rimozione. Questo lavaggio può
durare fino a 10-30 minuti senza che i risultati finali
dell'analisi varino. Eliminare la soluzione di lavag-
gio PBS dopo l'uso. Per risultati ottimali, cambiare
il PBS al punto mediano e usare un agitatore
magnetico.
REAGENTE ANTICORPO ENZIMATICO (coprire i poz-
8.
zetti con 12-14 gocce)
Rimuovere uno alla volta i vetrini dal PBS e im-
mergerli 3-5 volte in acqua deionizzata o distillata.
PROCEDURA DI ANALISI
Tamponare il vetrino sul lato con carta bibula
o con carta assorbente in modo da eliminare
l'acqua in eccesso. Riportare immediatamente
il vetrino nella camera di incubazione e coprire
completamente i pozzetti usando il reagente
anticorpo enzimatico; iniziare mettendo una goc-
cia su ogni pozzetto. Ripetere l'operazione per
ciascun vetrino. Il reagente anticorpo enzimatico
è stato titolato al fine di compensare l'acqua de-
ionizzata o distillata residua che resta sul vetrino
dopo il risciacquo.
NOTA: è importante che i pozzetti dei vetrini non
si asciughino durante questa procedura onde
evitare il danneggiamento del substrato. TAM-
PONARE O ASCIUGARE IL VETRINO IN MANIERA
CHE LO STESSO NON RESTI SENZA REAGENTE
ANTICORPO ENZIMATICO PER PIÙ DI 15 SECONDI.
INCUBAZIONE DEI VETRINI (30±5 minuti a tempera-
9.
tura ambiente, ovvero 18-24°C)
Mettere il coperchio sulla camera di incubazione
e incubare il/i vetrino/i per 30 minuti (±5 minuti) a
temperatura ambiente (18-24°C).
RISCIACQUO COL PBS
10.
Rimuovere il/i vetrino/i dal piatto dell'incubatore
e sciacquare brevemente con PBS. Non far
zampillare il tampone direttamente sui pozzetti.
LAVAGGIO COL PBS (10 minuti)
11.
Lavare il/i vetrino/i per 10 minuti con PBS in
un piatto per la colorazione del vetrino o una
vaschetta Coplin. Si raccomanda di agitare con
delicatezza all'immersione del vetrino, al punto
mediano e alla rimozione. Questo lavaggio può
durare fino a 10-30 minuti senza che i risultati finali
dell'analisi varino.
INCUBAZIONE DEL REAGENTE COLORATO (30±5
12.
minuti a temperatura ambiente, ovvero 18-24°C)
Rimuovere uno alla volta i vetrini dal PBS e im-
mergerli 3-5 volte in acqua deionizzata o distillata
e tamponare il vetrino sul lato con carta bibula o
carta assorbente in modo da rimuovere l'acqua
in eccesso. Mettere immediatamente il/i vetrino/i
in una vaschetta Coplin contenente reagente
colorato attivato ed incubare per 30 minuti.
13. RISCIACQUO COL PBS
Rimuovere un vetrino alla volta dalla vaschetta
Coplin e sciacquare ciascun lato del vetrino per
4-5 secondi con PBS. Non far zampillare il tam-
pone direttamente sui pozzetti. Mettere ciascun
vetrino risciacquato con PBS in una vaschetta
Coplin piena di acqua deionizzata o distillata fino
a che tutti i vetrini sono stati tolti dal reagente
colorato. Passare subito al punto 14.
14. MONTAGGIO DEL VETRINO COPRIOGGETTI
Rimuovere uno alla volta i vetrini dal PBS e im-
mergerli 3-5 volte in acqua deionizzata o distillata
e tamponare il vetrino sul lato con carta bibula o
carta assorbente in modo da rimuovere l'acqua
in eccesso. NON TAMPONARE O NON ASCIUGARE
IL VETRINO IN MANIERA CHE RIMANGA SENZA
COPRIVETRINO PER PIÙ DI 15 SECONDI. Aggiun-
gere 4-5 gocce di mezzo di fissaggio semiperma-
nente lungo la linea mediana di ciascun vetrino.
Posizionare con attenzione il vetrino coprioggetto,
evitando vuoti d'aria, abbassando delicata-
mente il vetrino coprioggetto da un estremo
all'altro del vetrino.
NOTA: un eccesso di mezzo di fissaggio sul vetrino
può avere come risultato la mancanza di risoluzi-
one chiara delle cellule (immagine sfocata).
L'eccesso del mezzo di fissaggio può essere
eliminato dal vetrino tamponando delicatamente
il vetrino coprioggetto con carta assorbente o
carta per pulire lenti evitando qualsiasi movi-
mento diretto del vetrino coprioggetto. I vetrini
possono essere letti immediatamente oppure
possono essere conservati per lungo tempo ad
una temperatura di 2-10°C senza alcuna perdita
di reattività.
PER ASSISTENZA TECNICA:
+1 916-363-2649
oppure a mezzo e-mail:
techservice@immunoconcepts.com
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