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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
CONTROL DE CALIDAD
Para el control de calidad se dispondrán los controles
positivo, negativo y de PBS en los pocillos al efecto que
se encuentran en todos los portaobjetos. El control posi-
tivo debe dar una tinción de color azul-morado oscuro
en los núcleos de las células, con un patrón claramente
discernible característico del suero de control utilizado.
El citoplasma puede teñirse de color azul-púrpura claro
en el pocillo de control positivo. El control negativo
debe mostrar una tinción de color azul-morado pálido
del citoplasma y el núcleo, sin patrón discernible de
tinción nuclear. El control PBS se emplea para observar
la tinción inespecífica del reactivo de anticuerpos enz-
imáticos, y no debe mostrar tinción azul. Si los controles
no se ven como se ha descrito, la prueba no es válida
y debe repetirse.
CONTROL TITULABLE OPCIONAL
Para interpretar los títulos, muchos laboratorio empie-
zan por el pocillo que contiene la muestra más diluida,
y van "retrocediendo" hasta la dilución 1:40. El primer
pocillo en el que se aprecie un patrón discernible de
tinción nuclear corresponde al título que se considera
como criterio de valoración. Recomendamos utilizar
esta técnica para determinar los criterios de valoración
de los títulos.
El título medio y el rango de títulos (± una dilución
a cada lado de la media) determinados han sido
establecidos en nuestro laboratorio y se consideran
la norma. Este control se facilita para que cada labo-
ratorio pueda evaluar la reproductibilidad (precisión)
de sus análisis de ANA. Como quiera que este control
no ha sido diseñado como indicador de la exactitud
de la titulación, cada laboratorio deberá establecer
su propio criterio de valoración del título medio para
cada muestra, utilizando esta información para evaluar
la reproductibilidad (precisión) de unos ciclos a otros.
Mediante la reiterada evaluación de este control titula-
ble utilizando el sistema de an*lisis de ANA Colorzyme®
de Immuno Concepts, se ha establecido un título
medio para cada número de lote. El número de lote, el
título medio y el rango de títulos (± una dilución doble a
cada lado de la media) figuran en la etiqueta del vial
y deben servir como guía para el funcionamiento del
sistema de análisis.
Es importante no confundir la intensidad de la tinción
con la presencia o ausencia de anticuerpos antinucle-
ares. La clave para determinar si una determinada
dilución de suero es positiva radica en la aparición
de un patrón claramente discernible, sea cual sea la
intensidad de la tinción.
Este control titulable mostrará el típico patrón moteado
que se asocia al anticuerpo RNP. También puede
aparecer un segundo patrón de NSp I (varias manchas
aisladas en el núcleo de las células que se encuentran
en la interfase); pero el patrón que se empleará como
criterio de valoración será el típico moteado correspon-
diente a RNP.
Puede que los valores obtenidos en nuestro laboratorio
difieran de los suyos. He aquí algunos de los muchos
factores que pueden afectar a sus resultados:
1. Correcta alineación del haz de luz del microscopio.
Consulte las instrucciones del manual del microsco-
pio.
2. La apertura numérica del objetivo. La apertura
numérica está relacionada con la capacidad de
absorción de luz y con la resolución del objetivo.
La apertura numérica va impresa a un lado del
objetivo.
3. Precisión y exactitud de la técnica de dilución, del
equipo y de la realización de los procedimientos
de análisis.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL PACI-
ENTE
Se recomienda un aumento máximo de 200X para la
detección selectiva de positivos y negativos, y de 400X
para el reconocimiento de patrones y la visualización
de células mitóticas.
Negativos: Se considera que un suero es negativo para
la presencia de anticuerpos antinucleares si la tinción
es igual o inferior a la del pocillo de control negativo,
sin patrón claramente discernible. Puede que el
citoplasma muestre una tinción débil, más brillante en
la región no cromosómica de las células mitóticas, pero
sin patrón nuclear claramente discernible.
Positivos: Se considera que un suero es positivo si el nú-
cleo muestra un patrón de tinción claramente discern-
ible en una mayoría de las células que se encuentran
en la interfase.
Títulos: Para interpretar los títulos, muchos laboratorio
empiezan por el pocillo que contiene la muestra más
diluida, y van "retrocediendo" hasta la dilución 1:40. El
primer pocillo en el que se aprecie un patrón discern-
ible corresponde al título que se considera como
criterio de valoración. Recomendamos utilizar esta
técnica para determinar los criterios de valoración de
los títulos. Es importante no confundir la intensidad de
la tinción con la presencia o ausencia de anticuer-
pos antinucleares. La clave para determinar si una
determinada dilución de suero es positiva radica en
la aparición de un patrón claramente discernible, sea
cual sea la intensidad de la tinción.
Precaución: Algunos sueros pueden presentar tinción
en núcleos y citoplasmas sin patrón nuclear evidente.
Este fenómeno suele deberse a los anticuerpos heterófi-
los, y se considerará resultado negativo (31).
TINCIÓN ENZIMÁTICA
No se ha observado que la intensidad de la tinción
tenga un valor clínico; sólo tiene un valor limitado
como indicador del título (29). Para simplificar la
interpretación, anote los resultados de la selección
que sean muy positivos o muy negativos, y efectúe la
titulación en consecuencia.
Reacción muy positiva: Tinción de color azul-púrpura
oscuro a muy oscuro, perfil celular bien definido, patrón
nuclear claramente definido.
Reacción positiva: Tinción de color azul-púrpura tenue
o amortiguada, con gran variabilidad de la tinción de
unas células a otras; puede que el perfil celular esté
peor definido en alguna células, aunque la mayoría
presente un patrón de tinción claramente discernible.
NOTA: Como las células crecen directamente en la
superficie del portaobjetos, no todas se encuentran en
la misma fase del ciclo celular. No es raro ver diferentes
intensidades de tinción en unas y otras células, debido
a la diferencia en la concentración y la localización de
los diferentes antígenos durante el ciclo celular.
NOTIFICACIÓN DE RESULTADOS
Selección: Los resultados deben ser notificados como
muy positivos o positivos en la dilución 1:40; y hay que
informar del patrón de tinción del núcleo.
Titulación: El resultado que se notifica es el de la última
dilución en la que se observa una tinción claramente
discernible. Si el resultado se observa con la dilución 1:
2560, se notificará como superior a 1:2560. Los títulos
de 1:40 a 1:80 se consideran bajos; de 1:160 a 1:320,
medios; y de 1:640 en adelante, elevados.
DETECCIÓN DEL PATRÓN
Homogéneo: Tinción sólida del núcleo, con o sin
enmascaramiento evidente de los nucléolos. La región
cromosómica de las células mitóticas en metafase es
claramente positiva, con una intensidad de la tinción
suave o periférica superior o igual a la de los núcleos
en interfase.
Sinónimos: Difuso; sólido.
Antígenos nucleares: ADNbc; ADNn; DNP; histona.
Asociación a enfermedades: Los títulos elevados
sugieren LES. Los títulos bajos sugieren LES u otras
enfermedades del tejido conjuntivo (32).
Periférico: Tinción sólida, sobre todo alrededor de la
región externa del núcleo, con tinción más débil del
centro de éste. La región cromosómica de las células
mitóticas en metafase es claramente positiva, con una
intensidad de la tinción suave o periférica superior o
igual a la de los núcleos en interfase.
Sinónimos: Borde, áspero, membranoso.
Antígenos nucleares: ADNbc, ADNmc, ADNn, DNP,
histona.
Asociación a enfermedades: los títulos elevados
sugieren LES; los títulos bajos sugieren LES u otras
enfermedades del tejido conjuntivo (32).
Moteado: Tinción granular áspera o fina del núcleo,
generalmente sin tinción fluorescente de los nucléolos.
La región no cromosómica de las células mitóticas en
metafase se tiñe, mientras que la región cromosómica
no lo hace.
Antígenos nucleares: Sm; RNP; Scl-70; SS-A; SS-B; y
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