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ANA COLORZYME®-TESTVERFAHREN
1.
PUFFER REKONSTITUIEREN (PBS)
Inhalt eines Pufferbeutels in einem Liter deionisi-
ertem oder destilliertem Wasser auflösen. Die
PBS-Waschpufferlösung kann verschlossen und
gekühlt bei 2-10 °C bis zu vier Wochen aufbe-
wahrt werden.
FARBREAGENS REKONSTITUIEREN
2.
Inhalt eines Beutels mit 150 ml deionisiertem oder
destilliertem Wasser auflösen. Gut durchmischen,
bis das Pulver völlig aufgelöst ist. Dieses Farbrea-
gens ist 30 Tage stabil, wenn es bei Raumtemper-
atur in einem geschlossenen Behälter aufbewahrt
wird. Dieses Farbreagens kann bis zu 30 Tage
lang, oder bis eine Farbänderung oder Ausfällung
zu beobachten ist, wiederverwendet werden.
Trübungen oder Schimmern bei Wiederverwend-
ung, ohne sichtbare Ausfällungen, sind normal.
Je nach Gebrauchshäufigkeit können 150 ml Col-
orzyme® Farbreagens mit bis zu 20 Objektträgern
verwendet werden.
PATIENTENPROBEN VERDÜNNEN
3.
Screening: Patientenproben 1:40 verdünnen,
indem 0,05 ml (50 µl) Serum zu 1,95 ml rekonstitui-
ertem PBS zugegeben werden.
Semiquantitative Titrierung: Für die weitere Titrier-
ung Reihenverdünnungen der Serumprobe (z. B.
1:80, 1:160, 1:320...1:2560) unter Verwendung von
PBS herstellen.
SUBSTRATTRÄGER VORBEREITEN (20-25 µl/
4.
Vertiefung)
Objektträger aus der Folie entnehmen und
Kontrollseren wie folgt in den Kontrollvertiefungen
platzieren: Tropfflasche mit Kontrollserum um-
drehen und vorsichtig drücken, bis an der Spitze
ein Tropfen austritt. Den Tropfen vorsichtig in die
entsprechende Kontrollvertiefung geben, dabei
direkten Kontakt der Tropferspitze mit der Ober-
fläche des Objektträgers vermeiden. Das positive
Kontrollserum in die mit "+" markierte Vertiefung,
das negative Kontrollserum in die mit "-" markierte
Vertiefung und einen Tropfen PBS-Puffer in die
mit "PBS" markierte Vertiefung geben. 1 Tropfen
(20-25 µl) Patientenprobe in die nummerierten
Vertiefungen geben.
HINWEIS: Für allgemeine Screening-Verfahren
wird die homogene Positivkontrolle empfohlen.
Für die semiquantitative Titrierung wählen Sie die
Positivkontrolle aus, deren Verfärbungsmuster die
meiste Ähnlichkeit mit der Screening-Probe hat
(z.B. ist für Patientenproben, die beim Screening
eine fleckige Verfärbung ergeben, eine gefleckte
Positivkontrolle zu verwenden).
ACHTUNG: DIREKTER KONTAKT DER TROPFERSPITZE
MIT DEM OBJEKTTRÄGER KANN DAS ANTIGEN-SUB-
STRAT BESCHÄDIGEN.
5.
OBJEKTTRÄGER INKUBIEREN (30 ± 5 Minuten bei
Zimmertemperatur, d.h. 18-24 °C)
Objektträger in eine feuchte, bedeckte Schale
legen (z. B. Petrischale mit angefeuchtetem
Papierhandtuch). 30 Minuten (± 5 Minuten) bei
Zimmertemperatur (18-24 °C) abgedeckt inkubie-
ren lassen.
6.
PBS-SPÜLUNG
Objektträger aus der Inkubationsschale nehmen
und mit Spritzflasche, Pasteur- oder serologischer
Pipette kurz mit PBS spülen. Den Puffer nicht direkt
in die Vertiefungen einspritzen.
HINWEIS: Um bei Objektträgern eine Kreuz-
kontamination zu vermeiden, den PBS auf die
Mittellinie des Objektträgers spritzen, dabei den
Träger zuerst in Richtung der oberen Vertiefungen
neigen, anschließend in Richtung der unteren
Vertiefungen.
PBS-WASCHGANG (10 Minuten)
7.
Objektträger in einem entsprechenden Gefäß 10
Minuten mit PBS waschen (Glaszylinder, Schale).
Beim Eintauchen, in der Mitte des Waschvor-
gangs und beim Herausnehmen leicht hin- und
herbewegen. Der Waschvorgang kann ohne Aus-
wirkung auf die Testergebnisse auf 10-30 Minuten
ausgedehnt werden. PBS-Waschlösung nach
Gebrauch entsorgen. Für optimale Ergebnisse
sollte nach Ablauf der halben Waschzeit der PBS-
Waschpuffer gewechselt und ein magnetischer
Rührer verwendet werden.
8.
ENZYM-ANTIKÖRPER-REAGENS (Vertiefungen mit
12-14 Tropfen bedecken)
Jeweils einen Objektträger aus dem PBS-Puffer
nehmen und 3-5 Mal in deionisiertes oder destil-
liertes Wasser tauchen. Überschüssiges Wasser
durch seitliches Ausklopfen auf Saugpapier oder
Papierhandtuch entfernen. Objektträger sofort
wieder in die Inkubationskammer geben und die
Vertiefungen vollständig mit Enzym-Antikörper-
reagens füllen; beginnend mit einem Tropfen pro
Vertiefung. Vorgang für alle Objektträger wieder-
holen. Das Enzym-Antikörperreagens wurde titriert,
um das auf dem Objektträger verbliebene deio-
nisierte oder destillierte Wasser zu kompensieren.
HINWEIS: Es ist wichtig, dass die Vertiefungen auf
dem Objektträger während dieses Vorgangs
nicht austrocknen, andernfalls kann das Substrat
beschädigt werden.
DEN OBJEKTTRÄGER NICHT TROCKEN TUPFEN
ODER WISCHEN, ODER LÄNGER ALS 15 SEKUNDEN
OHNE ENZYM-ANTIKÖRPERREAGENS STEHEN LAS-
SEN.
OBJEKTTRÄGER INKUBIEREN (30 ± 5 Minuten bei
9.
Zimmertemperatur, d.h. 18-24 °C)
Deckel in eine Inkubationsschale legen und
Objektträger 30 Minuten (± 5 Minuten) bei Zim-
mertemperatur (18-24 °C) inkubieren lassen.
PBS-SPÜLUNG
10.
Objektträger aus der Inkubationsschale nehmen
und kurz mit PBS spülen. Den Puffer nicht direkt in
die Vertiefungen einspritzen.
11.
PBS-WASCHGANG (10 Minuten)
Objektträger in einem entsprechenden Gefäß 10
Minuten mit PBS waschen (Glaszylinder, Schale).
Beim Eintauchen, in der Mitte des Waschvor-
gangs und beim Herausnehmen leicht hin- und
herbewegen. Der Waschvorgang kann ohne Aus-
wirkung auf die Testergebnisse auf 10-30 Minuten
ausgedehnt werden.
12.
FARBREAGENS INKUBIEREN (30 Minuten bei Zim-
mertemperatur, 18-24 °C)
Jeweils einen Objektträger aus dem PBS ent-
nehmen, 3-5 Mal in deionisiertes oder destilliertes
Wasser tauchen und Objektträger seitlich auf
Saugpapier oder Papierhandtuch ausklopfen, um
verbliebenes Wasser zu entfernen. Objektträger
sofort in einen Coplin-Glaszylinder mit aktiviertem
Farbreagens einlegen und 30 Minuten inkubieren.
13.
PBS-Spülung
Jeweils einen Objektträger aus dem Coplin-Glas-
zylinder nehmen und auf allen Seiten 4-5 Sekun-
den lang mit PBS spülen. Den Puffer nicht direkt
in die Vertiefungen einspritzen. Jeden mit PBS
gespülten Objektträger in einen mit destilliertem
oder deionisiertem Wasser gefüllten Coplin-Glas-
zylinder einlegen, bis alle Objektträger aus dem
Farbreagens entfernt sind. Sofort mit Schritt 14
weiter machen.
14.
DECKGLAS AUFSETZEN
Jeweils einen Objektträger aus dem destillierten
oder deionisierten Wasser nehmen und Objekt-
träger auf Saugpapier oder Papierhandtuch
ausgebreitet seitlich ausklopfen, um verbliebenes
Wasser zu entfernen. DEN OBJEKTTRÄGER
NICHT TROCKEN TUPFEN ODER WISCHEN, ODER
LÄNGER ALS 15 SEKUNDEN OHNE DECKGLAS
STEHEN LASSEN. 4-5 Tropfen semipermanentes
Montagemedium entlang der Mittellinie jedes
Objektträgers hinzugeben. Deckglas vorsichtig in
Position bringen; dabei Lufteinschlüsse vermeiden;
hierzu das Deckglas vorsichtig an einem Ende des
Objektträgers aufsetzen und auf das andere Ende
herablassen.
HINWEIS: Überschüssiges Montagemedium
auf dem Objektträger kann zu ungenügender
Auflösung der Zellen (verschwommenes Bild)
führen. Überschüssiges Eindeckmedium kann
vom Objektträger entfernt werden, indem das
Deckglas mit Saugpapier abgetupft wird, ohne
es dabei zu bewegen. Die Objektträger können
sofort ausgewertet oder für längere Zeit bei 2-10
°C ohne Reaktivitätsverlust aufbewahrt werden.
TECHNISCHE UNTERSTÜTZUNG: +1-916-363-2649
oder via E-Mail:
techservice@immunoconcepts.com
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