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COLORZYME® ANA-TESTSYSTEM
Nur zur In vitro-Diagnostik
ZUSAMMENFASSENDE ERKLÄRUNG DES TESTS
INDIKATION: Dies ist ein indirekter Enzym-Antikörpertest
für den semiquantitativen Nachweis von antinukleären
Antikörpern in humanem Serum. Der Test dient als
Hilfestellung beim Nachweis von Antikörpern, die mit
systemischen rheumatischen Erkrankungen assoziiert
werden.
Der Terminus antinukleäre Antikörper (ANA) ist ein
Oberbegriff zur Beschreibung von Autoantikörpern
gegen verschiedene Zellkernproteine. Frühere Studien
dieser Autoantikörper, die mit Immunofluoreszenztec
hniken arbeiteten, haben einige wenige Spezifitäten
von Zellkernproteinen aufgezeigt (1). Wegen der hohen
Korrelation positiver ANA mit systemischem Lupus
erythematosus (SLE) ist diese Erkrankung bei negativen
ANA grundsätzlich auszuschließen (2).
Auch wenn DNA-spezifische Antikörper weiterhin
eine hohe Korrelation mit SLE (3) aufweisen, wurde
eine Reihe nukleärer (4) und zytoplasmischer (5-7)
Makromoleküle nachgewiesen und mit anderen
Bindegewebserkrankungen in Verbindung gebracht
(8-10). Einige dieser Antikörper haben offenbar einen
diagnostischen und/oder prognostischen Wert bei
progressiver systemischer Sklerose (11-12), gemischter
Bindegewebskrankheit (13-15), Sjögren-Syndrom (16-17),
Polymyositis (18) und/oder rheumatoider Arthritis (19).
Aus diesem Grunde werden ANA-Tests mittlerweile als
allgemeine Screening-Methode zum Nachweis von
Bindegewebskrankheit anerkannt (20).
Die Sensitivität des ANA-Tests hängt von verschiedenen
Faktoren ab, wie Art des verwendeten Substrats,
Fixierungsverfahren und den im Serum vorhandenen
ANA-Typen. Zellkultursubstrate weisen im Allgemeinen
eine höhere Sensitivität als Gewebeteile auf (21-24).
Das Immuno Concepts Colorzyme® ANA-Testsystem
mit mitotischen* Human-epitheloiden Zellen (HEp-
2) stellt ein fortgeschrittenes System zum Nachweis
von ANA dar. Es hat sich gezeigt, dass HEp-2 Zellen
mit mitotischer Ausprägung eine höhere Sensitivität
aufweisen und eine bessere Mustererkennung als
die klassischen Nierensubstrate von Mäusen beim
Nachweis von Antikörpern in progressiver systemischer
Sklerose (PSS) bieten (25). Die mitotische Ausprägung
hilft bei der Differenzierung der Mustererkennung sowie
beim Nachweis von zuvor unbekannten nukleären
Antigenen, die in mitotisch aktiven Zellen in höheren
Konzentrationen vorhanden sind (26-28).
*Der Terminus Mitose wird zur Beschreibung des
Zellteilungsprozesses verwendet. Dieser Prozess lässt sich
in sechs grundsätzliche Phasen gliedern: Interphase,
Prophase, Metaphase, Anaphase, Telophase und
Zytokinese.
TESTPRINZIP
Das Colorzyme® ANA-Testsystem von Immuno
Concepts arbeitet mit der Technik der indirekten
Enzym-Antikörper. Dabei werden Patientenproben mit
Antigensubstrat inkubiert, um spezifische Bindungen von
Autoantikörpern an Zellkerne zu ermöglichen. Wenn
ANA vorhanden sind, bildet sich ein stabiler Antigen-
Antikörperkomplex. Nach dem Waschen, bei dem
nicht-spezifische Antikörper entfernt werden, wird das
Substrat mit einem anti-Human-Antikörperreagens, das
an Meerrettich-Peroxidase konjugiert ist, inkubiert. Bei
positivem Ergebnis bildet sich ein stabiler dreiteiliger
Komplex, bestehend aus an human-antinukleäre
Antikörper gebundenen Enzym-Antikörpern, welche
ihrerseits an Zellkern-Antigen gebunden sind. Dieser
Komplex kann durch Inkubation des Objektträgers in
Farbreagens, das ein enzymspezifisches Substrat enthält,
sichtbar gemacht werden. Die Reaktion zwischen
enzymmarkiertem Antikörper und enzymspezifischem
Substrat führt zu einer Verfärbung auf dem Objektträger,
die unter einem gewöhnlichen Lichtmikroskop sichtbar
ist. In positiven Proben weisen die Zellkerne eine
dunkelblau bis purpurne Verfärbung mit einem für
diese Zellkern-Antigenverteilung charakteristischen
Muster innerhalb der Zellen auf. Wenn die Probe für
ANA negativ ist, zeigt der Zellkern keine deutliche
Zellkernverfärbung. Das Zytoplasma kann eine
schwache Verfärbung aufweisen, wobei der außerhalb
des Chromosomen liegende Bereich mitotischer Zellen
eine dunklere Verfärbung aufweisen kann.
SYSTEMKOMPONENTEN
ENTHALTEN)
Verwendung: Sämtliche Komponenten werden
gebrauchsfertig geliefert, ohne dass Aliquotieren oder
eine Rekonstitution erforderlich sind (mit Ausnahme
(IM LIEFERUMFANG
von PBS-Puffer und Farbreagens, die vor Gebrauch
in deionisiertem oder destilliertem Wasser aufgelöst
werden müssen).
Aufbewahrung: Alle Komponenten können gekühlt
bei 2-10 °C aufbewahrt werden. Nach Rekonstitution
sollte PBS-Puffer in geschlossenen Behältern bei 2-10
°C aufbewahrt werden. Nach Rekonstitution kann
Colorzyme® Farbreagens im geschlossenen Behälter
bei Zimmertemperatur bis zu 30 Tage lang aufbewahrt
werden. Je nach Gebrauchshäufigkeit können 150 ml
Colorzyme® Farbreagens mit bis zu 20 Objektträgern
verwendet werden.
Stabilität: Alle Komponenten sind bis mindestens 12
Monate nach Herstellungsdatum stabil. Keine Komponenten
nach Überschreiten des Verfallsdatums verwenden.
REAKTIVE REAGENZIEN
Substratträger: †Katalognummer 2007 (sieben
Vertiefungen); 2013 (dreizehn Vertiefungen).
Objektträger für ANA-Substrat mit sieben bzw. dreizehn
Vertiefungen, mit direkt in den Testvertiefungen
stabilisierten Hep-2 Zellen (mit mitotischer Ausprägung).
Durch eine spezielle Konstruktion wird die Gefahr
der Kreuzkontamination der Vertiefungen bei
den Tests minimiert. Die Objektträger beinhalten
Kontrollvertiefungen für positive, negative und
PBS-Reagenzien zur Erleichterung der korrekten
Interpretation der Ergebnisse. Der Objektträgerbeutel
ist mit einem inaktiven nicht-toxischen Gas gefüllt, das
zur Stabilität der Zellen beiträgt. Wenn der Beutel beim
Herausnehmen des Objektträgers aus dem Kit nicht
aufgepumpt ist, ist der Beutel beschädigt und sollte
nicht verwendet werden.
Homogenes Positivkontrollserum: Katalognummer
2021. Gebrauchsfertiger Tropfer mit 1,0 ml positivem
Human-Kontrollserum mit DNA- und/oder DNP-Zellkern-
spezifischen Antikörpern. Dieses Serum zeigt eine
homogene Verfärbungsreaktion auf HEp-2 Zell-Substrat
von Immuno Concepts. Der Chromosombereich
mitotischer Zellen zeigt dieselbe homogene Färbung.
Dieses Reagens enthält
0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel.
Gefleckte Positivkontrolle: Katalognummer 2022.
Gebrauchsfertiger Tropfer mit 0,5 ml positivem
Human-Kontrollserum mit Sm- und/oder RNP-Zellkern-
Antigen-spezifischen Antikörpern. Dieses Serum weist
eine häufig anzutreffende fleckige Verfärbung auf
HEp-2 Zell-Substrat von Immuno Concepts auf. Der
Chromosombereich mitotischer Zellen zeigt eine
negative Färbung. Dieses Reagens enthält 0,1 %
Natriumazid als Konservierungsmittel.
Nukleolus-Positivkontrolle: Katalognummer 2023.
Gebrauchsfertiger Tropfer mit 0,5 ml positivem
Human-Kontrollserum mit Nukleolus-Antigen-
spezifischen Antikörpern. Dieses Serum weist eine
Verfärbungsreaktion des Nukleolus auf HEp-2 Zell-
Substrat von Immuno Concepts auf. Dieses Reagens
enthält 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel.
Zentromer-Positivkontrolle: Katalognummer 2025.
Gebrauchsfertiger Tropfer mit 0,5 ml positivem
Human-Kontrollserum mit Chromosom-Zentromer-
spezifischen Antikörpern (Kinetochor). Dieses Serum
weist eine diskrete fleckige Verfärbungsreaktion auf
HEp-2 Zell-Substrat von Immuno Concepts auf. Der
Chromosombereich mitotischer Zellen zeigt dieselbe
diskrete Fleckenbildung und Färbung. Dieses Reagens
enthält 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel.
Titrierbares Kontrollserum: Katalognummer 2026.
Gebrauchsfertiges Fläschchen mit 1,0 ml positivem
Human-Kontrollserum zur unverdünnten Verwendung
als Patientenprobe. Dieses Reagens enthält 0,1 %
Natriumazid als Konservierungsmittel. Siehe Etikett für
Titrierungswert.
Negativkontrollserum: Katalognummer 2031.
Gebrauchsfertiger Tropfer mit 1,0 ml negativem Human-
Kontrollserum. Auch wenn das Negativkontrollserum
eine schwache Verfärbung des Zytoplasma aufweist,
wobei der außerhalb des Chromosomen liegende
Bereich der mitotischen Zelle eine hellere Färbung
aufweist, zeigt sich kein deutliches Färbungsmuster im
Zellkern. Dieses Reagens enthält 0,1 % Natriumazid als
Konservierungsmittel.
Enzym-Antikörperreagens: Katalognummer 4009 (9,0
ml), 4075 (23 ml). Anti-human-IgG, (schwere und leichte
Ketten) von der Ziege, an Meerrettich-Peroxidase (HRP)
konjugiert. Gebrauchsfertiges Reagens in Präzisions-
Tropffläschchen mit 9,0 ml für alle 10 Objektträger im
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