immuno concepts Colorzyme ANA Für Professionellen Gebrauch Seite 33

COLORZYME® ANA TESTSYSTEM
FÖR DIAGNOSTISK ANVÄNDNING IN VITRO
SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTET
AVSEDD ANVÄNDNING: Det här är ett indirekt enzyman-
tikroppstest för halvkvantitativ detektion av antinukleär
antikropp i humanserum. Detta testsystem skall använ-
das som ett hjälpmedel vid detektion av antikroppar
som är associerade med systemisk reumatisk sjukdom.
Antinukleär antikropp (ANA) är en allmän term som
används för att beskriva autoantikroppar mot olika cell-
nukleära proteiner. Tidiga studier av dessa autoantik-
roppar visar med hjälp av immunofluorescerande teknik
ett litet antal nukleärproteinspecificiteter (1). Tack vare
det höga sambandet mellan positiv ANA och systemisk
lupus erytematosus (SLE) utesluter negativ ANA i stort
sett sjukdomen (2).
Även om DNA-specifika antikroppar forfarande har ett
högt sjukdomssamband med SLE (3), har även ett antal
nukleära (4) och cytoplasmiska (5-7) makromolekyler
upptäckts och associerats med andra bindvävssjukdo-
mar (8-10). Vissa av dessa antikroppar har diagnostisk
och/eller prognostisk betydelse vid progressiv systemisk
skleros (11-12), blandad bindvävssjukdom (13-15) Sjög-
rens syndrom (16-17), polymyosit (18), och/eller reuma-
toid artrit (19). Tack vare dessa sjukdomsassociationer
är ANA-testning nu blivit etablerat som screeningmetod
för bindvävssjukdom (20).
ANA-testkänsligheten varierar beroende på vilken typ
av substrat och vilka fixativmetoder som används samt
vilka ANA-typer som finns i sera. Cellkultursubstrat up-
pvisar i allmänhet större känslighet än vävnadssektioner
(21-24). Immuno Concepts Colorzyme® ANA testsystem
med mitotiska* humanepiteloidceller (HEp-2) är ett av
de mest avancerade systemen för detektion av ANA.
HEp-2-celler med mitotiska former har visat sig ha större
känslighet och ger skarpare mönsterigenkänning än
klassiskt musnjuresubstrat när det gäller detektion av
antikroppar vid progressiv systemisk skleros (PSS) (25).
mitotiska former underlättar igenkännandet av olika
mönster och detektion av tidigare orapporterade nuk-
leära antigener, vilka förekommer i högre koncentra-
tioner i mitotiskt aktiva celler (26-28).
* Mitos är en term som används för att beskriva cell-
delningsprocessen. Den delas vanligtvis in i sex faser:
interfas, profas, metafas, anafas, telofas och cytokines.
TESTPRINCIP
Immuno Concepts Colorzyme® ANA testsystem är en
indirekt enzymantikroppmetod. Patientprover inkuberas
med antigensubstrat för att tillåta specifik bindning av
autoantikroppar till cellkärnorna. Om ANA förekom-
mer bildas ett stabilt antigen/antikroppkomplex. Efter
tvättning för att avlägsna obundna antikroppar odlas
substratet med en antihuman antikroppreagens
konjugerad med pepparrotsperoxidas. Om resultatet är
positivt, bildas ett stabilt komplex i tre delar bestående
av en enzymantikropp bunden till en human antinukleär
antikropp, som i sin tur är bunden till en nukleär antigen.
Detta komplex kan visualiseras genom att objektglaset
odlas i en färgreagens som innehåller ett enzymspecifikt
substrat. Reaktionen mellan den enzymmärkta antikrop-
pen och det specifika substratet leder till en färgreak-
tion på objektglaset, vilket kan ses i standardljusmikros-
kop. I positiva prover har cellkärnorna en mörkblå/lila
färgning med ett mönster som är karaktäristiskt för den
aktuella nukleära antigendistributionen inom cellerna.
Om provet är ANA-negativt, uppvisar cellkärnan inte
något klart urskiljningsbart mönster av nukleär färgning.
Cytoplasman kan uppvisa en svag färgning, medan
det icke-kromosoma området i de mitotiska cellerna
kan uppvisa en mörkare färgning.
SYSTEMKOMPONENTER
Användning: Alla komponenter levereras bruksfärdiga
utan krav på delning eller rekonstitution (förutom PBS-
bufferten och färgreagensen som måste lösas upp i
avjoniserat eller destillerat vatten före användning).
Förvaring: Alla komponenter kan förvaras i kylskåp i
2-10° C. Efter rekonstitution skall PBS-buffertreagensen
förvaras i en sluten behållare i kylskåp i 2-10° C. Efter
rekonstitution skall Colorzyme® färgreagensen lagras i
en sluten behållare i rumstemperatur i högst 30 dagar.
Beroende på hur ofta den används kan 150 ml Col-
orzyme® färgreagens användas med maximalt tjugo
objektglas.
(MATERIAL SOM INGÅR)
Stabilitet: Alla komponenter är stabila i minst tolv
månader från tillverkningsdatum. Använd inte kompo-
nenterna efter utgångsdatum.
REAKTIVA REAGENSER
Objektglas för substrat: †Katalognr 2007 (sjubrunnars);
2013 (trettonbrunnars). Sju- eller trettonbrunnars ANA-
objektglas för substrat som används med HEp-2-celler
(med mitotiska former) som är odlade och stabilise-
rade direkt på testbrunnarna. Ett unikt vallgravsfor-
mat objektglas minimerar korskontamination mellan
brunnarna under analysen. Objektglasen innehåller
även extra kontrollbrunnar som är positivt eller negativt
betecknade samt PBS för att underlätta korrekt tolkning
av resultat. Objektglaspåsen är fylld med en stabil
giftfri gas som bidrar till cellernas stabilitet. Om påsen
inte verkar vara fylld när objektglaset avlägsnas från
satsen är påsen skadad, och objektglaset skall då inte
användas.
Homogen positiv kontroll: Katalognr 2021. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 1,0 ml positivt humankon-
trollserum med antikropp specifik för DNA och/eller
DNP-nukleära antigener. Detta serum uppvisar en ho-
mogen färgningsreaktion med Immuno Concepts HEp-
2-cellsubstrat. Kromosomområdet i de mitotiska cellerna
uppvisar samma homogena färgreaktion. Reagensen
innehåller 0,1 % natriumazid som konserveringsmedel.
Fläckig positiv kontroll: Katalognr 2022. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 0,5 ml positivt humankon-
trollserum med antikropp som är specifik för Sm- och/
eller RNP-nukleära antigener. Detta serum uppvisar en
av de mest vanliga fläckiga färgreaktioner som setts
med Immuno Concepts HEp-2-cellsubstrat. Kromoso-
mområdet i de mitotiska cellerna uppvisar en negativ
färgreaktion. Reagensen innehåller 0,1 % natriumazid
som konserveringsmedel.
Nukleolär positiv kontroll: Katalognr 2023. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 0,5 ml positivt humankon-
trollserum med antikropp som är specifik för nukle-
olära antigener. Detta serum uppvisar en nukleolär
färgningsreaktion med Immuno Concepts HEp-2-cell-
substrat. Reagensen innehåller 0,1 % natriumazid som
konserveringsmedel.
Centromer positiv kontroll: Katalognr 2025. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 0,5 ml positivt humankon-
trollserum med antikropp som är specifik för kromoso-
mala centromerer (kinetochore). Detta serum uppvisar
enstaka fläckiga färgningsreaktioner med Immuno
Concepts HEp-2-cellsubstrat. De mitotiska cellernas
kromosomområde uppvisar samma enstaka fläckiga
färgningsreaktion. Reagensen innehåller 0,1 % natriuma-
zid som konserveringsmedel.
Titrerbart kontrollserum: Katalognr 2026: Bruksfärdig
ampull innehållande 1,0 ml positivt humankontrollserum
som skall behandlas som ett outspätt patientprov.
Reagensen innehåller 0,1 % natriumazid som kon-
serveringsmedel. Se flaskans etikett för information om
antikroppnivå.
Negativt kontrollserum: Katalognr 2031. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 1,0 ml negativt humankon-
trollserum. Även om det negativa kontrollserumet kan
uppvisar en svag färgning av cytoplasmat med en
ljusare färgning av den mitotiska cellens icke-kromoso-
mområde, uppvisar det ingen urskiljbar nukleär färgn-
ing. Denna reagens innehåller 0,1 % natriumazid som
konserveringsmedel.
Enzymantikroppreagens: Katalognr 4009 (9,0 ml),
4075 (23 ml). Getantihuman IgG (tunga och lätta
kedjor) konjugerade med pepparrotsperoxidas (HRP).
Reagensen levereras bruksfärdiga i kompletta testsatser
i precisionspipettflaskor med 9,0 ml för vart tionde
objektglas.
Färgreagens: ††Katalog nr 4066. HRP-specifikt enzym-
substratpulver som innehåller 4-kloro 1-naftol. Varje
förpackning innehåller pulver för att framställa 150 ml
självaktiverande Colorzyme® färgreagens.
Framställning: Lös upp innehållet i en påse i 150 ml
avjoniserat eller destillerat vatten. Blanda väl tills prepa-
ratet har lösts upp helt och hållet. Denna färgreagens
är stabil i 30 dagar i rumstemperatur i stängd behållare.
Färgreagensen kan återanvändas i maximalt 30 dagar,
eller tills det syns någon färgförändring eller fällning.
Grumlighet eller opalescens utan synlig fällning vid
återanvändning är normalt. Beroende på användning-
stakten kan 150 ml Colorzyme® färgreagens användas
med maximalt tjugo objektglas.
33