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INTERPRETATION DES RESULTATS
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Les contrôles positif, négatif et PBS doivent être ef-
fectués dans les puits dédiés au contrôle qualité sur
chaque lame. Le contrôle positif doit présenter une
fluorescence bleu violet sombre des noyaux des
cellules, avec un motif clairement visible et caractéris-
tique du sérum de contrôle utilisé. Le cytoplasme peut
prendre une légère coloration bleu violet dans le puits
du contrôle positif. Le contrôle négatif doit présenter
une légère fluorescence bleu violet simultanée du
cytoplasme et du noyau, mais sans motif fluorescent
nucléaire clairement visible. Le contrôle PBS est utilisé
pour observer la fluorescence non spécifique du
réactif immuno-enzymatique et ne doit pas présenter
de fluorescence bleue. Si les contrôles n'apparaissent
pas tel que décrit, le test n'est pas valable et doit être
recommencé.
CONTRÔLE TITRABLE OPTIONNEL
Lors de la lecture des titres, de nombreux laboratoires
commencent par lire le puits qui contient l'échantillon
le plus dilué puis poursuivent « à rebours » jusqu'à la dilu-
tion 1:40. Le premier puits dans lequel une fluorescence
nucléaire clairement perceptible est visible est le résul-
tat du titrage. Nous recommandons cette technique
pour la détermination des résultats de titrage.
Le titre moyen et la plage de titrage (± une dilution de
part et d'autre de la moyenne) déterminés ont été
établis dans notre laboratoire et sont communiqués à
titre indicatif. Ce contrôle est fourni pour permettre à
chaque laboratoire d'évaluer la reproductibilité (préci-
sion) de son test ANA. Étant donné que ce contrôle
n'est pas destiné à être un indicateur de la précision
du titrage, chaque laboratoire doit établir sa propre
référence de titrage moyen pour cet échantillon et
utiliser cette information pour évaluer la reproductibilité
inter-analyse (précision).
Par de multiples dosages de ce contrôle titrable réalisés
à l'aide du système de test ANA Colorzyme® d'Immuno
Concepts, une valeur de titre moyen a été établie pour
chaque numéro de lot. Le numéro de lot, le titre moyen
et la plage de titrage (± une double dilution de part et
d'autre de la moyenne) sont indiqués sur l'étiquette du
flacon et doivent être utilisés à titre indicatif.
Il est important de ne pas confondre intensité de la
fluorescence et présence ou absence d'anticorps anti-
nucléaires. Le facteur clé à prendre en compte dans la
détermination de la positivité d'une dilution de sérum
donnée est l'apparition d'un motif clairement visible,
indépendamment de l'intensité de la fluorescence.
Ce contrôle titrable présentera l'image mouchetée typ-
ique associée aux anticorps RNP. On peut également
observer une seconde répartition de NSp I (plusieurs
mouchetures discrètes dans le noyau des cellules en in-
terphase) mais c'est l'image mouchetée RNP classique
qui doit être utilisée pour la lecture du résultat.
Les valeurs obtenues dans notre laboratoire peuvent
différer de vos propres valeurs. De nombreux facteurs
peuvent affecter vos résultats, notamment les éléments
suivants :
1. Alignement correct de l'axe optique du micro-
scope. Pour les instructions, se reporter au manuel
du microscope.
2. Ouverture numérique de l'objectif. L'ouverture nu-
mérique est liée au pouvoir collecteur de lumière et
à la résolution de l'objectif. Ce chiffre est imprimé
sur le côté de l'objectif.
3. Précision et exactitude de la technique de dilution,
de l'équipement et de la réalisation des procé-
dures de test.
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS DU PATIENT
Un grossissement total de 200X est recommandé pour
le test positif/négatif tandis qu'un grossissement total de
400X est conseillé pour l'identification de divers motifs et
la visualisation des cellules mitotiques.
Négatifs: Un sérum est considéré comme négatif aux
anticorps anti-nucléaires lorsque la fluorescence des
noyaux est inférieure ou égale à celle observée pour les
puits du contrôle négatif sans motif clairement visible.
Le cytoplasme peut présenter une légère fluorescence,
avec une fluorescence plus vive de la région non
chromosomique des cellules mitotiques, mais sans motif
nucléaire clairement visible.
Positifs: Un échantillon de sérum est considéré comme
positif lorsque le noyau présente un motif fluorescent
clairement visible pour une majorité de cellules inter-
phasiques.
Titres: Lors de la lecture des titres, de nombreux
laboratoires commencent par lire le puits qui contient
l'échantillon le plus dilué puis poursuivent « à rebours
» jusqu'à la dilution 1:40. Le premier puits dans lequel
un motif clairement perceptible est visible constitue
le résultat du titrage. Nous recommandons cette
technique pour la détermination des résultats du
titrage. Il est important de ne pas confondre intensité
de la fluorescence et présence ou absence d'anticorps
anti-nucléaires. Le facteur clé à prendre en compte
dans la détermination de la positivité d'une dilution
de sérum donnée est l'apparition d'un motif nucléaire
clairement visible, indépendamment de l'intensité de la
fluorescence.
Attention: Certains sérums peuvent présenter une
fluorescence nucléaire et cytoplasmique sans motif
nucléaire apparent. Ce phénomène est généralement
attribué aux anticorps hétérophiles et doit être consi-
déré comme négatif (31).
FLUORESCENCE ENZYMATIQUE
Le degré d'intensité de la fluorescence n'a pas de
valeur clinique avérée et n'est qu'un indicateur limité
du titre (29). Pour simplifier l'interprétation, enregistrer
les résultats du test comme étant fortement positifs ou
positifs et le titre en fonction de cela.
Réaction fortement positive: Fluorescence bleu violet
sombre à très sombre, contour net des cellules, motif
nucléaire parfaitement défini.
Réaction positive: Fluorescence bleu violet faible ou
voilée avec une plus grande variabilité de la fluores-
cence entre les cellules ; le contour des cellules peut
être moins bien défini pour certaines cellules avec une
majorité de cellules présentant toujours un motif fluores-
cent clairement visible.
REMARQUE: Les cellules étant directement cultivées
sur la lame, toutes ne se trouvent pas dans la même
phase du cycle cellulaire. Il n'est pas rare d'observer
des intensités de fluorescence variables d'une cellule
à l'autre en raison des différences de concentration et
d'emplacement des divers antigènes pendant le cycle
cellulaire.
COMMUNICATION DES RESULTATS
Test: Les résultats doivent être notés fortement positifs
ou positifs à la dilution 1:40 et le motif fluorescent du
noyau doit être communiqué.
Titrage: Les résultats doivent être communiqués comme
la dernière des dilutions successives dans laquelle une
fluorescence est clairement visible. Les résultats présent-
ant une forte réaction à la dilution 1:2560 doivent être
notés supérieurs à 1:2560. Les titres allant de 1:40 à 1:80
sont considérés comme des titres faibles, ceux de 1:160
à 1:320 comme moyens et ceux supérieurs ou égaux à
1:640 comme élevés.
DÉTECTION DES MOTIFS
Homogène: Fluorescence uniforme du noyau avec ou
sans effacement apparent des nucléoles. La région
chromosomique des cellules mitotiques en métaphase
est clairement positive avec une intensité de fluores-
cence lisse ou périphérique supérieure ou égale aux
noyaux interphasiques.
Synonymes: Diffuse, uniforme.
Antigènes nucléaires: ADN double brin, ADNn,
DNP, histone.
Associations cliniques: Les titres élevés suggèrent un
LED. Les titres plus faibles suggèrent un LED ou
d'autres collagénoses (32).
Périphérique: Fluorescence uniforme, principalement
autour de la région extérieure du noyau, avec une
fluorescence plus faible vers le centre du noyau. La
région chromosomique des cellules mitotiques en mé-
taphase est clairement positive avec une intensité de
fluorescence lisse ou périphérique supérieure ou égale
aux noyaux interphasiques.
Synonymes: Marginale, hérissée, membraneuse.
Antigènes nucléaires: ADN double brin, ADN simple
brin, ADNn, DNP, histone.
Associations cliniques: Les titres élevés suggèrent un
LED ; les titres plus faibles suggèrent un LED ou
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