immuno concepts Colorzyme ANA Für Professionellen Gebrauch Seite 36

MITOTISK CELL
(Metafas)
Sera som är positiva för DNA, DNP och/eller histon (t
ex Immuno Concepts homogena positiva kontroll) up-
pvisar ljus färgning av dessa cellers kromosomområde. I
prover som är negativa för DNA, DNP och/eller histon (t
ex Immuno Concepts fläckiga positiva kontroll) uppvisar
de mitotiska cellerna inte någon kromsomfärgning, och
kan därför vara svåra att se.
ANVÄNDNING AV MITOTISKA CELLER
Detektion av fläckig kontra homogen antikropp: Ett
finfläckigt färgningsmönster är ibland svårt att skilja
från homogen färgning. Om mönstret är homogent, är
de mitotiska cellernas kromosomer fast färgade. Om
mönstret är strikt fläckigt, visar området utanför kromo-
somerna en finfläckig reaktion.
OBSERVERA: Om hela den mitotiska cellen är finfläckig
samtidigt som kromosomområdet har en fast färgning,
är det högst troligt att det finns två eller flera antikrop-
par. Rapportera screeningspädningen som fläckig/
homogen och titrera varje antikropp till dess ändpunkt.
Perifer kontra nukleär membranantikropp: Antikrop-
par som uppvisar ett perifert mönster associeras i
allmänhet med DNA-/DNP-nukleära antigener. Höga
antikroppnivåer av dessa antikroppar tyder på SLE.
I substrat som inte innehåller mitotiska celler kan det
perifera mönstret vara svårt att skilja från en nukleär
membranantikropp. Genom att använda Immuno
Concepts mitotiska celler går det att urskilja dessa mön-
ster, eftersom de mitotiska cellernas kromosomområde
kommer att färgas intensivt i ett perifert mönster, men
inte färgas av en nukleär membranantikropp. Skillnaden
är kliniskt betydelsefull, eftersom nukleära membranan-
tikroppar inte har någon DNA-/DNP specificitet och inte
är associerade med SLE (35).
Anti-centromer antikropp (ACA) kontra atypiskt färgad
antikropp som liknar en centromer: För att kunna veri-
fiera anticentromerantikroppen bör kromosomområdet
i de mitotiska cellerna färgas ljust med åtskiljda fläckar.
Om kromosomområdet inte färgas har antikroppen
ingen kinetokorspecificitet eller association med sklero-
dermias CREST-variant (36). Om kromosomområdet inte
färgas är antikroppen inte någon anticentromer och
skall därför rapporteras som "atypiskt fläckig".
CYTOPLASMISK FÄRGNING
Även om autoantikroppar mot cytoplasmiska antigener
inte vanligtvis associeras med bindvävssjukdom, kan
sådana antikroppar detekteras genom epiteliala cell-
struktursubstrat (37). Mitokondriala och glatta muskelan-
tikroppar är de två antikroppar som vanligtvis upptäcks
och allmänt associeras med mononukleos, kroniskt aktiv
hepatit och leversjukdom (38-39). Med hjälp av HEp-
2-cellsubstrat har den glatta muskelantikroppen även
påvisats hos patienter med vårtor (40).
Antimitokondrial antikropp (AMA): Enstaka fläckar som
är koncentrerade i cellens perinukleära område och
utvidgade i lägre densitet i cytoplasmans yttre om-
råden. Detta bör skiljas från anti-Golgi-antikroppen, som
i allmänhet endast färgar ena sidan av det perinuk-
leära området, och från antiribosomal antikropp, som
uppvisar finare fläckar med ett nätformigt utseende
som överensstämmer med platsen för endoplasmisk
retikulum i cellen.
OBSERVERA: Perinukleära fläckar kan enkelt åtskiljas från
perifer nukleärfärgning genom att de mitokondriska
fläckarna bildar en avbruten fläckig färgning runt
utsidan på det nukleära membranet, medan perifera
sera bildar en fast och jämn färgning inuti det nukleära
membranet.
RAPPORTERA SERA SOM NEGATIVT FÖR ANTINUKLEÄRA
ANTIKROPPAR OCH BEKRÄFTA POSITIVT SVAR FÖR
Kromosomområde
Cytoplasma /
Nukleoplasma
ICKE-MITOTISK CELL
(Interfas)
ANTIMITOKONDRISK ANTIKROPP MED AMA-SPECIFIKT
SUBSTRAT.
Antiglatt muskelantikropp (ASMA): Mycket fin fibrös
färgning över hela cellcytoplasman med ett spin-
delvävsliknande utseende. Till skillnad från mitokondrisk
antikropp är glatt muskelantikropps färgning likformig
över hela cytoplasman och kan även sträcka sig över
kärnan. Mitotiska celler uppvisar i allmänhet stora,
åtskiljda fläckar utanför kromosomområdet. Glatt
muskelantikropp har visat sig ha en hög specificitet till
aktin (41-42).
RAPPORTERA SERA SOM NEGATIVT FÖR ANTINUK-
LEÄR ANTIKROPP OCH BEKRÄFTA POSITIVT SVAR FÖR
ANTIGLATT MUSKELANTIKROPP MED ASMA-SPECIFIKT
SUBSTRAT.
TESTETS BEGRÄNSNINGAR
1. Diagnos kan inte ställas enbart på grundval av
detektion av antinukleär antikropp. Läkaren måste
tolka dessa resultat med hänsyn till patientens
historia och symptom, de fysiska upptäckterna och
andra diagnostiska metoder.
2. Behandling bör inte påbörjas enbart på grundval
av ett positivt test för antinukleära antikroppar.
Kliniska indikationer, andra laboratorieupptäckter
och läkarens kliniska intryck måste beaktas innan
eventuell behandling påbörjas.
3. Vissa läkemedel, bland annat procainamid och hy-
dralazin, kan orsaka en lupus erytematos-liknande
sjukdom (43). Patienter med läkemedelsinducerad
LE kan uppvisa positiv homogen eller homogen/
perifer ANA, som i allmänhet är riktad mot nukleära
histoner (44).
4. En liten andel patienter med SLE uppvisar eventuellt
inte ANA genom indirekt immunoenzym, men kan
uppvisa ANA med andra metoder (45).
5. Även om en högt titrerad ANA i hög grad kan tyda
på bindvävssjukdom, bör detta inte användas för
diagnos, utan snarare ses som en del av patientens
totala sjukdomshistoria.
6. Färgningsmönstren ändras ofta i och med fortlö-
pande titrering av sera. Detta beror i allmänhet på
förekomsten av mer än en nukleär antikropp.
7. Positiva ANA kan även förekomma hos en liten
andel patienter med smittsamma och/eller neo-
plastiska sjukdomar (9).
FÖRVÄNTADE VÄRDEN
I ett stort medicincentrum på ett universitet framställdes
följande data över en tvåårsperiod med hjälp av HEp-2-
cell ANA-substrat. Tabell 1.
PRESTANDA
En jämförande studie har visat att Immuno Concepts
Colorzyme® ANA testsystem motsvarar Immuno
Concepts indirekta immunofluorescerande ANA-test.
50 serumprover screenades och titrerades på båda
systemen. Dessa prover omfattade autoantikroppar
som vanligtvis upptäckts med HEp-2-substrat, ovanliga
och atypiska mönster och sera som är på gränsen till
att vara negativa. Enzymresultaten stod till 98 procent
i relation till Immuno Concepts immunofluorescerande
ANA för test av positiva, negativa och blandade
mönstersera. (46).
Immuno Concepts fluorescerande ANA-testsystem har
tidigare utvärderats genom jämförelse med två andra
fluorescerande antikropptester som finns på marknaden
(46). Studien omfattade 97 serumprover från nor-
mala individer och diagnoser inklusive systemisk lupus
erytematosus (SLE), blandad bindvävssjukdom (MCTD),
Raynauds progressiva systemiska skleros-CREST-vari-
ant (PSS-CREST), reumatoid artrit (RA), reumatoid artrit
hos barn (JRA) samt andra bindvävssjukdomar. Sera
testades med de screeningspädningar som respektive
36
Cytoplasma
Nukleärt Membran
Nukleoplasma
Nukleol