Componenti Del Sistema - immuno concepts Colorzyme ANA Für Professionellen Gebrauch

SISTEMA DI ANALISI DEGLI ANA COLORZYME®
PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO
RIEPILOGO E INFORMAZIONI DI BASE
USO PREVISTO: analisi enzimatica indiretta degli
anticorpi per la determinazione semiquantitativa degli
anticorpi antinucleari nel siero umano. Questo sistema
di analisi deve essere usato come ausilio nella deter-
minazione di anticorpi associati alla malattia reumatica
sistemica.
Anticorpo antinucleare (ANA) è un termine generico
usato per descrivere gli anticorpi contro varie nucleo-
proteine cellulari. I primi studi su questi anticorpi, con
l'uso di tecniche di immunofluorescenza, rivelarono
alcune specificità proteiche nucleari selezionate.(1)
A causa dell'alta correlazione dell'ANA positivo con il
lupus eritematoso sistemico (SLE), un ANA negativo fu
principalmente escluso dalla patologia.(2)
Sebbene anticorpi specifici del DNA continuino a
dimostrare un'elevata correlazione della patologia
con SLE,(3) è stato anche scoperto un certo numero di
macromolecole nucleari (4) e citoplasmatiche(5-7) as-
sociate ad altre patologie del tessuto connettivo.(8-10)
Alcuni di questi anticorpi sembrano avere un significato
diagnostico e/o prognostico nella sclerosi sistemica
progressiva(11-12), nella patologia mista del con-
nettivo,(13-15) nella sindrome di Sjögren,(16-17) nella
polimiosite, (18) e/o nell'artrite reumatoide.(19) A causa
delle associazioni tra queste patologie, il test ANA è ora
riconosciuto come uno strumento di screening generale
per le malattie del tessuto connettivo.(20)
La sensibilità del test ANA varia a seconda del tipo di
substrato usato, delle procedure di fissaggio e dei tipi di
ANA presenti nei sieri. I substrati della coltura cellulare
in genere mostrano una maggiore sensibilità rispetto
alle sezioni di tessuto.(21-24) Il sistema di analisi degli
ANA Colorzyme® della Immuno Concepts con cellule
epitelioidi umane mitotiche* (HEp-2) rappresenta uno
dei sistemi più avanzati per il rilevamento degli ANA. È
stato dimostrato che, nel rilevamento di anticorpi nella
sclerosi sistemica progressiva (PSS), le cellule HEp-2
con figure mitotiche hanno una maggiore sensibilità e
danno un pattern di riconoscimento più nitido rispetto
al classico substrato di rene di topo.(25) Le figure
mitotiche aiutano nel riconoscimento del pattern
differenziale come pure nel rilevamento di antigeni
nucleari non riportati precedentemente, presenti in
concentrazioni più elevate nelle cellule mitoticamente
attive.(26-28)
*Mitosi è un termine usato per descrivere il processo di
suddivisione cellulare. Per lo più si suddivide in sei fasi,
ovvero interfase, profase, metafase, anafase, telofase
e citocinesi.
PRINCIPIO DEL TEST
Il sistema di analisi degli ANA Colorzyme® della Immuno
Concepts è una tecnica di analisi enzimatica indiretta
degli anticorpi. I campioni del paziente sono incubati
con substrato antigene per consentire lo specifico
legame degli autoanticorpi ai nuclei delle cellule. Se
gli ANA sono presenti, si forma un complesso stabile
antigene-anticorpo. Dopo il lavaggio per rimuovere
anticorpi non specificamente legati, il substrato è
incubato con un anticorpo anti-umano coniugato con
perossidasi di rafano. Quando i risultati sono positivi,
avviene la formazione di un complesso stabile in tre
parti composto dall'anticorpo enzimatico legato
all'anticorpo antinucleare umano che è quindi legato
all'antigene nucleare. Questo complesso può essere
visualizzato incubando il vetrino in reagente colorato
contenente un substrato enzimatico specifico. La
reazione tra l'anticorpo etichettato come enzimatico
e il substrato specifico dell'enzima dà come risultato
una reazione colorata sul vetrino, visibile mediante
normale microscopia ottica. Nei campioni positivi,
i nuclei delle cellule mostreranno una fluorescenza
blu scuro-viola con un pattern di colorazione carat-
teristico della particolare distribuzione dell'antigene
nucleare nelle cellule. Se il campione è negativo per
l'ANA, il nucleo non mostrerà un pattern di colorazione
nucleare chiaramente distinguibile. Il citoplasma può
mostrare una colorazione debole mentre la regione
non cromosomica delle cellule mitotiche può mostrare
una colorazione più intensa.

COMPONENTI DEL SISTEMA

Uso: tutti i componenti sono pronti per l'uso senza
che siano necessarie la suddivisione in aliquote o la
ricostituzione (eccetto il tampone PBS e il reagente
(MATERIALI FORNITI)
colorato che devono essere sciolti in acqua deionizzata
o distillata prima dell'uso).
Conservazione: tutti i componenti possono essere
conservati alla temperatura di 2-10°C. Dopo la ricosti-
tuzione, il tampone PBS deve essere conservato in un
contenitore chiuso alla temperatura di 2-10°C. Dopo la
ricostituzione, il reagente colorato Colorzyme® deve es-
sere conservato in un contenitore chiuso a temperatura
ambiente fino a 30 giorni. A seconda della frequenza
d'uso, è possibile utilizzare fino a venti vetrini con 150 ml
di reagente colorato Colorzyme®.
Stabilità: tutti i componenti restano stabili per almeno 12
mesi dalla data di produzione. Non usare alcun compo-
nente oltre la data di scadenza.
REAGENTI REATTIVI
Vetrini del substrato: † numero di catalogo 2007 (con
sette pozzetti); 2013 (con tredici pozzetti). Vetrini per
substrato ANA con sette o tredici pozzetti che usano
cellule HEp-2 (con figure mitotiche) coltivate e stabiliz-
zate direttamente sui pozzetti per analisi. L'esclusivo
design a fossa del vetrino minimizza la contaminazione
incrociata dei pozzetti durante l'analisi. I vetrini com-
prendono anche ulteriori pozzetti di controllo positivo,
negativo e PBS per favorire l'esatta interpretazione dei
risultati. La busta del vetrino viene riempita con un gas
inerte non tossico che favorisce la stabilità delle cellule.
Se il contenitore non appare ben gonfio quando il
vetrino è rimosso dal kit, la busta è danneggiata e il
vetrino non deve essere usato.
Controllo positivo omogeneo: numero di catalogo
2021. Fiala contagocce pronta all'uso contenente 1,0
ml di siero di controllo umano positivo con anticorpo
specifico per il DNA e/o antigeni nucleari DNP. Questo
siero dimostra una reazione a colorazione omogenea
sul substrato cellulare HEp-2 della IC. La regione cromo-
somica delle cellule mitotiche mostra la stessa reazione
alla colorazione omogenea. Questo reagente contiene
sodio azide allo 0,1% come conservante.
Controllo positivo a chiazze: numero di catalogo 2022.
Fiala contagocce pronta per l'uso contenente 0,5
ml di siero di controllo umano positivo con anticorpo
specifico per antigeni nucleari Sm e/o RNP. Questo siero
mostra una delle reazioni a colorazione a chiazze più
comunemente viste sul substrato cellulare HEp-2 della
Immuno Concepts. La regione cromosomica delle
cellule mitotiche mostra una reazione a colorazione
negativa. Questo reagente contiene sodio azide allo
0,1% come conservante.
Controllo positivo nucleolare: numero di catalogo 2023.
Fiala contagocce pronta per l'uso contenente 0,5
ml di siero di controllo umano positivo con anticorpo
specifico per antigeni nucleolari. Questo siero dimostra
una reazione a colorazione nucleolare sul substrato cel-
lulare HEp-2 della IC. Questo reagente contiene sodio
azide allo 0,1% come conservante.
Controllo positivo centromero: numero di catalogo
2025. Fiala contagocce pronta per l'uso contenente
0,5 ml di siero di controllo umano positivo con anticorpo
specifico per centromeri cromosomici (cinetocore).
Questo siero dimostra una reazione con colorazione
a chiazze sul substrato cellulare HEp-2 della IC. La
regione cromosomica delle cellule mitotiche mostra
la stessa discreta reazione a colorazione a chiazze.
Questo reagente contiene sodio azide allo 0,1% come
conservante.
Siero di controllo titolabile: numero di catalogo 2026.
Fiala pronta per l'uso contenente 1,0 ml di siero di con-
trollo umano positivo da trattare come campione del
paziente, non diluito. Questo reagente contiene sodio
azide allo 0,1% come conservante. Vedere l'etichetta
della fiala per il valore del titolo.
Siero di controllo negativo: numero di catalogo 2031.
Fiala contagocce pronta per l'uso contenente 1,0 ml
di siero di controllo umano negativo. Sebbene il siero di
controllo negativo possa dimostrare una leggera col-
orazione del citoplasma con colorazione più brillante
della regione non cromosomica della cellula mitotica,
esso dimostra un pattern non distinguibile di colorazione
nucleare. Questo reagente contiene sodio azide allo
0,1% come conservante.
Reagente anticorpo enzimatico: numero di catalogo
4009 (9,0 ml), 4075 (23 ml). Anti-IgG umana di capra
(catene pesanti e leggere) coniugata con HRP (horse-
radish peroxidase, perossidasi di rafano). Il reagente è
pronto all'uso e si presenta in flaconi contagocce di
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