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PROCÉDURE DE TEST ANA COLORZYME
RECONSTITUTION DU TAMPON
1.
Dissoudre le contenu d'un sachet de tampon
dans un litre d'eau désionisée ou distillée. Le
tampon peut être couvert et conservé à 2-10 °C
pendant quatre semaines.
RECONSTITUTION DU REACTIF COLORE
2.
Dissoudre le contenu d'un sachet dans 150 ml
d'eau désionisée ou distillée. Bien mélanger
jusqu'à dissolution complète. Ce réactif coloré,
conservé dans un récipient fermé, est stable pen-
dant 30 jours à température ambiante. Il peut être
réutilisé pendant 30 jours ou jusqu'à observation
d'un changement de couleur ou d'un précipité.
L'aspect trouble ou l'opalescence, si aucun
précipité n'est visible lors de la réutilisation, est
normal. En fonction de la fréquence d'utilisation,
150 ml de réactif coloré Colorzyme® peuvent être
utilisés avec vingt lames maximum.
DILUTION DES ÉCHANTILLONS DES PATIENTS
3.
Test: Diluer les échantillons à 1:40 en ajoutant 0,05
ml (50 µl) de sérum à 1,95 ml de PBS reconstitué.
Titrage semi-quantitatif: Procéder à des dilutions
successives du ou des échantillons à analyser (ex.:
1:80, 1:160, 1:320...1:2560) à l'aide du PBS.
PRÉPARATION DES LAMES DE SUBSTRAT
4.
µl/puits)
Sortir les lames des sachets et placer les sérums
de contrôle sur les puits de contrôle comme suit:
retourner le flacon compte-gouttes du contrôle et
le presser légèrement jusqu'à ce qu'une goutte
apparaisse à l'extrémité de l'embout. Mettre
soigneusement la goutte en contact avec le puits
de contrôle approprié en évitant tout contact
direct de l'embout du compte-gouttes avec la
surface de la lame. Placer le contrôle positif sur le
puits marqué « + », le contrôle négatif sur le puits
marqué « - » et une goutte de tampon PBS sur le
puits marqué « PBS ». Ajouter 1 goutte (20-25 µl)
d'échantillon du patient dans les puits numérotés.
REMARQUE
: Pour le test général, le contrôle posi-
tif homogène est recommandé. Pour le titrage
semi-quantitatif, sélectionner le contrôle positif
illustrant l'image fluorescente la plus proche de
l'échantillon à analyser (ex.: pour un échantillon
de patient induisant une image mouchetée lors
du test, utiliser le contrôle positif moucheté).
ATTENTION
: LE CONTACT DIRECT DE L'EMBOUT
DU COMPTE-GOUTTES AVEC LA SURFACE DE LA
LAME PEUT ALTÉRER LE SUBSTRAT ANTIGÉNIQUE.
INCUBATION DES LAMES
5.
à température ambiante, soit 18-24 °C)
Placer les lames dans une chambre humide
couverte (une boîte de Pétri avec des serviettes
en papier humidifiées conviendra). Mettre à
incuber, couvercle fermé, pendant 30 minutes (±5
minutes) à température ambiante (18-24 °C).
RINÇAGE EN TAMPON PBS
6.
Sortir les lames du plateau de l'incubateur et les
rincer rapidement avec le tampon PBS à l'aide
d'un flacon gicleur ou d'une pipette Pasteur ou
sérologique. Ne pas asperger le tampon directe-
ment sur les puits.
REMARQUE: Afin d'éviter toute contamination
croisée sur les lames, diriger le jet du tampon
PBS le long de la ligne médiane de la lame, en
l'inclinant d'abord vers la rangée de puits supéri-
eure puis vers la rangée inférieure.
LAVAGE EN TAMPON PBS
7.
Laver la ou les lames pendant 10 minutes avec
du PBS dans une cuve à coloration ou une jarre
Coplin. Il est recommandé d'agiter légèrement
la cuve au moment de l'immersion et du retrait
de la lame ainsi qu'à mi-parcours. Ce lavage
peut être prolongé de 10 à 30 minutes sans que
les résultats des tests finaux n'en soient affectés.
Jeter la solution de lavage PBS après utilisation.
Pour obtenir des résultats optimums, changer le
tampon PBS à mi-parcours et utiliser un agitateur
magnétique.
RÉACTIF IMMUNO-ENZYMATIQUE
8.
puits avec 12 à 14 gouttes)
Retirer les lames une à une du tampon PBS et
les immerger 3 à 5 fois dans de l'eau désionisée
ou distillée. Tapoter la tranche de la lame sur du
papier absorbant ou des serviettes en papier pour
éliminer l'excès d'eau. Remettre immédiatement
la lame dans la chambre d'incubation et recou-
vrir complètement les puits de réactif immuno-
enzymatique. Commencer par placer une goutte
sur chaque puits. Recommencer l'opération pour
chaque lame. Le réactif immuno-enzymatique a
été titré de façon à compenser l'eau désionisée
(PBS)
(20-25
(30 minutes ±5 minutes
(10 minutes)
(couvrir les
14
ou distillée résiduelle restant sur la lame après le
rinçage.
REMARQUE
: Il est important que les puits de la
lame ne se dessèchent pas pendant cette procé-
dure sous peine d'altérer le substrat.
NE PAS SÉCHER LA LAME OU OUBLIER DE LA
RECOUVRIR DE RÉACTIF IMMUNO-ENZYMATIQUE
PENDANT PLUS DE 15 SECONDES.
INCUBATION DES LAMES
9.
à température ambiante, soit 18-24 °C)
Placer le couvercle sur la chambre d'incubation
et laisser les lames incuber pendant 30 minutes
(±5 minutes) à température ambiante (18-24 °C).
RINÇAGE EN TAMPON PBS
10.
Sortir les lames du plateau de l'incubateur et les
rincer rapidement avec du PBS. Ne pas asperger
le tampon directement sur les puits.
LAVAGE EN TAMPON PBS
11.
Laver la ou les lames pendant 10 minutes avec
du PBS dans une cuve à coloration ou une jarre
Coplin. Il est recommandé d'agiter légèrement la
cuve au moment de l'immersion et du retrait de
la lame ainsi qu'à mi-parcours. Ce lavage peut
être prolongé de 10 à 30 minutes sans que les
résultats des tests finaux n'en soient affectés.
INCUBATION DU RÉACTIF COLORÉ
12.
à température ambiante, soit 18-24 °C).
Sortir les lames une à une du tampon PBS et les
immerger 3 à 5 fois dans de l'eau désionisée ou
distillée puis tapoter la tranche de la lame sur du
papier absorbant ou des serviettes en papier pour
éliminer l'excès d'eau. Placer immédiatement
les lames dans une jarre Coplin contenant du
réactif coloré activé et laisser incuber pendant 30
minutes.
RINÇAGE EN TAMPON PBS
13.
Sortir les lames une à une de la cuve à rainures
et en rincer chaque côté 4 à 5 secondes avec
du PBS. Ne pas asperger le tampon directement
sur les puits. Placer chaque lame rincée au PBS
dans une jarre Coplin remplie d'eau désionisée
ou distillée jusqu'à ce que toutes les lames soient
sorties du réactif coloré. Passer immédiatement à
l'étape 14.
MONTAGE DE LA LAMELLE COUVRE-OBJET
14.
Retirer les lames une à une de l'eau désionisée
ou distillée puis tapoter la tranche de la lame sur
du papier absorbant ou des serviettes en papier
pour éliminer l'excès d'eau.
NE PAS SÉCHER LA LAME OU OUBLIER DE LA
RECOUVRIR DE LA LAMELLE COUVRE-OBJET
PENDANT PLUS DE 15 SECONDES. Ajouter 4 à 5
gouttes de milieu de montage semi-permanent
sur la ligne médiane de chaque lame. Mettre
soigneusement la lamelle couvre-objet en place
en évitant la formation de bulles d'air ; pour cela,
abaisser doucement la lamelle d'un côté de la
lame vers l'autre.
REMARQUE
: Un excès de milieu de montage sur
la lame peut entraîner un manque de résolu-
tion des cellules (image floue). Afin d'éliminer
l'excès de milieu de montage sur la lame, essuyer
soigneusement la lamelle couvre-objet avec du
papier absorbant ou un nettoyant optique tout
en évitant de déplacer la lamelle. Les lames
peuvent être lues immédiatement ou conservées
pendant une période prolongée entre 2 et 10 °C
sans perte de réactivité.
POUR L'ASSISTANCE TECHNIQUE :
+1 916-363-2649
ou messagerie électronique :
techservice@immunoconcepts.com
®
(30 minutes ±5 minutes
(10 minutes)
(30 minutes
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