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SISTEMA DE ANÁLISIS DE ANA COLORZYME®
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA
USO PREVISTO: Se trata de una determinación indi-
recta de anticuerpos enzimáticos para la detección
semicuantitativa de anticuerpos antinucleares en suero
humano. Este sistema de análisis ha de emplearse
como ayuda en la detección de anticuerpos asocia-
dos a las enfermedades reumáticas sistémicas.
"Anticuerpo antinuclear (ANA)" es un término general
que se emplea para referirse a los autoanticuerpos
dirigidos contra diversas proteínas del núcleo celular. En
los primeros estudios sobre estos autoanticuerpos, real-
izados con técnicas de inmunofluoresencia, se observa-
ron determinados detalles de unas pocas proteínas del
núcleo (1). A la vista de la elevada correlación entre
la presencia de ANA y el lupus eritematoso sistémico
(LES), basta con que no estén presentes para descartar
la enfermedad (2).
Aunque los anticuerpos específicos del ADN siguen
mostrando una elevada correlación con el LES (3),
también se han detectado algunas macromoléculas
nucleares (4) y citoplásmicas (5-7) asociadas a otras
enfermedades del tejido conjuntivo (8-10). Parece que
algunos de estos autoanticuerpos tienen un significado
diagnóstico y/o pronóstico en la esclerosis sistémica
progresiva (11-12), las enfermedades mixtas del tejido
conjuntivo (13-15), el síndrome de Sjögren (16-17), la
polimiositis (18) y/o la artritis reumatoide (19). Debido a
estas asociaciones a enfermedades, en la actualidad
se considera que la detección de ANA constituye una
herramienta general para la detección selectiva de las
enfermedades del tejido conjuntivo (20).
La sensibilidad de la prueba varía con el tipo de sustra-
tos utilizado, el procedimiento de fijación y los tipos de
ANA presentes en los sueros. Por lo general, los sustratos
de cultivos celulares muestran mayor sensibilidad que
los cortes de tejido (21-24). El sistema de análisis de
ANA Colorzyme® de Immuno Concepts con células
epitelioides humanas (HEp-2) mitóticas* representa
un avanzado sistema de inmunofluorescencia para la
detección de ANA. Se ha demostrado que las células
HEp-2 con figuras mitóticas son más sensibles y pro-
porcionan un modelo de reconocimiento más preciso
que el clásico sustrato de riñón de ratón, para detectar
anticuerpos en la esclerosis sistémica progresiva (ESP)
(25). Las figuras mitóticas mejoran el reconocimiento
diferencial del modelo y ayudan a detectar antígenos
nucleares no notificados anteriormente que alcanzan
concentraciones superiores en las células que se
encuentran en mitosis (26-28).
*Mitosis es un término que se emplea para describir el
proceso de división de las células. En general, se divide
en seis fases, a saber: interfase, profase, metafase,
anafase, telofase y citocinesia.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El sistema deanálisis de ANA Colorzyme® de Immuno
Conceptos es una técnica de detección enzimática
indirecta de anticuerpos. Las muestras de pacientes
se incuban con un sustrato antigénico que permite la
unión específica de los autoanticuerpos a los núcleos
de las células. Si hay ANA, se forma un complejo an-
tígeno-anticuerpo estable. Tras el lavado para retirar los
anticuerpos unidos de forma inespecífica, se incuba el
sustrato con anticuerpos antihumanos conjugados con
peroxidasa de rábano. Si los resultados son positivos,
se forma un complejo estable con tres partes: el anti-
cuerpo de la enzima unido al anticuerpo antinuclear
humano, unido a su vez al antígeno nuclear. Este com-
plejo se puede ver incubando el portaobjetos en el
reactivo de tinción que contiene un sustrato específico
de la enzima. La reacción entre el anticuerpo marcado
con la enzima y el sustrato específico de la enzima da
una reacción de color visible en el portaobjetos con un
microscopio óptico estándar. En las muestras positivas,
los núcleos celulares se teñirán de color azul-morado,
con un patrón de tinción característico de la particular
distribución del antígeno nuclear en las células. Si no
hay ANA en las muestras, el núcleo no presentará un
patrón de fluorescencia nuclear claramente discern-
ible. Puede que el citoplasma se tiña débilmente y que
la región no cromosómica de las células mitóticas lo
haga de forma más oscura.
COMPONENTES DEL SISTEMA
TRADOS)
Utilización: Todos los componentes se entregan listos
(MATERIALES SUMINIS-
para su empleo, sin necesidad de fragmentarlos ni
prepararlos (excepto el tampón PBS y el reactivo de
color, que deben ser disueltos en agua desionizada o
destilada antes de utilizarlos).
Conservación: Todos los componentes se pueden con-
servar entre 2 y 10 ºC. Una vez preparado, el reactivo
con tampón PBS debe conservarse en envase cerrado
y refrigerado entre 2 y 10 ºC. Una vez preparado, el
reactivo de color Colorzyme® debe ser conservado
en envase cerrado a temperatura ambiente durante
30 días como máximo. Dependiendo de la frecuencia
de utilización, se pueden utilizar 150 ml de reactivo de
color Colorzyme® con un máximo de 20 portaobjetos.
Estabilidad: Todos los componentes son estables al
menos durante 12 meses a partir de la fecha de fab-
ricación. No utilice los componentes pasada la fecha
de caducidad.
REACTIVOS
Portaobjetos de sustrato: †Nº de catálogo 2007 (siete
pocillos); 2013 (trece pocillos). Portaobjetos con siete
o trece pocillos con sustrato para ANA con células
HEp-2 (con figuras mitóticas) cultivadas y estabilizadas
directamente en los pocillos utilizados para el análisis.
El exclusivo diseño de los fosos del portaobjetos reduce
al mínimo la contaminación cruzada de los pocillos
durante la prueba. Además, los portaobjetos llevan
pocillos de control designados como positivo, negativo
y PBS, que ayudan a interpretar adecuadamente los
resultados. La bolsa que contiene el portaobjetos se
rellena con un gas inerte no tóxico que contribuye a la
estabilidad de las células. Si la bolsa no está inflada al
sacar el portaobjetos del kit, significa que la bolsa se ha
estropeado y el portaobjetos no debe ser utilizado.
Control positivo homogéneo: Nº de catálogo 2021. Vial
con cuentagotas listo para usar, que contiene 1,0 ml de
suero de control humano positivo con anticuerpo espe-
cífico contra el ADN y/o los antígenos nucleares DNP.
Este suero presenta una reacción de tinción homogé-
nea con el sustrato de células HEp-2 de IC. La región
cromosómica de las células mitóticas presenta la
misma reacción de tinción homogénea. Este reactivo
contiene azida sódica al 0,1 % como conservante.
Control positivo moteado: Nº de catálogo 2022. Vial
con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5 ml
de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra el Sm y/o los antígenos nucleares
DNP. Este suero da una de las reacciones de tinción
moteada más habituales que se observan con el
sustrato de células HEp-2 de IC. La región cromosómica
de las células mitóticas muestra una reacción de
tinción negativa. Este reactivo contiene azida sódica al
0,1 % como conservante.
Control positivo nucleolar: Nº de catálogo 2023. Vial
con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5 ml
de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra los antígenos del nucléolo. Este suero
presenta una reacción de tinción homogénea con el
sustrato de células HEp-2 de IC. Este reactivo contiene
azida sódica al 0,1 % como conservante.
Control positivo del centrómero: Nº de catálogo 2025.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5
ml de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra los centrómeros cromosómicos
(cinetocentro). Este suero presenta una reacción de
tinción homogénea con el sustrato de células HEp-2
de IC. La región cromosómica de las células mitóticas
muestra la misma reacción discreta de tinción mote-
ada. Este reactivo contiene azida sódica al 0,1 % como
conservante.
Suero de control titulable: Nº de catálogo 2026. Vial
listo para usar, que contiene 1,0 ml de suero de control
humano positivo que será tratado como si fuera una
muestra de paciente sin diluir. Este reactivo contiene
azida sódica al 0,1 % como conservante. Consulte el
valor de la titulación en la etiqueta del vial.
Suero de control negativo: Nº de catálogo 2031. Vial
con cuentagotas listo para usar, que contiene 1,0 ml
de suero de control humano negativo. Aunque el suero
de control negativo puede producir cierta tinción del
citoplasma al teñirse de forma más brillante la región
no cromosómica de la célula mitótica, no presenta
un patrón de tinción nuclear discernible. Este reactivo
contiene azida sódica al 0,1 % como conservante.
Reactivo con anticuerpos enzimáticos: Nº de catálogo
4009 (9,0 ml), 4075 (23 ml). IgG de cabra antihumana
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