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Arbeitsvorschriften
2.6 Freier Amino-Stickstoff (Ninhydrin-Methode nach EBC)
22
Prinzip
Die Untersuchungslösung wird bei pH 6,7 mit Ninhydrin erhitzt und
die entstehende Farbe bei 570 nm gemessen. Die Methode erfaßt
die Aminosäuren, Ammoniak und zusätzlich die endständigen
Alpha-Amino-Gruppen der Peptide und Proteine. Prolin wird bei der
verwendeten Wellenlänge teilweise mitbestimmt. Die Methode ist
für Alpha-Amino-Stickstoff nicht spezifisch, weil
Gamma-Amino-Buttersäure, welche in Würzen vorkommt, mit
Ninhiydrin ebenfalls eine Färbung ergibt.
Anwendungsbereiche
Bier, Würzen
Messbereich
0–400 mg/l
Zubehör
•
Reagenzgläser mit Schliffstopfen, 16 x 150 mm
•
Variable Pipette 1.0–5.0 ml (BBP 065)
•
Pipettenspitzen für Pipette (BBP 068)
•
Kochendes Wasserbad
•
Wasserbad von 20 °C
•
Spektralphotometer, 570 nm
•
10 mm Rechteckküvette OS
Reagenzien
•
Farbreagenz: 10,0 g Dinatrium - Hydrogenphosphat
(Na
HPO
x 12 H
2
4
2
(KH
PO
), 0,5 g Ninhydrin, 0,3 g Fructose in H
2
4
auf 100 ml auffüllen (Diese Lösung ist 2 Wochen in einer
dunklen Flasche haltbar. Der pH -Wert muss 6,6–6,8 betragen).
•
Verdünnungslösung: 2 g Kaliumjodat in 600 ml H
und 400 ml 96%iges Ethanol zusetzen
•
Stammlösung: 107,2 mg Glycin in 100 ml H
Stammlösung bei 0 °C aufbewahren.
•
Standardlösung: 1 ml Stammlösung mit H
auffüllen. Diese Standardlösung enthält 2 mg/l Aminostickstoff.
Probenvorbereitung
1. Würze 100-fach, Bier 50-fach verdünnen (1–3 mg/l
Aminostickstoff)
2. Probe, Standardlösung bzw. Blindwert jeweils dreifach
analysieren.
3. 2 ml der verdünnten Probe bzw. der Standardlösung bzw. H
in ein Reagenzglas pipettieren.
4. 1 ml Farbreagenz zusetzen, vermischen.
O), 6,0 g Kalium-dihydrogenphosphat
O lösen und
2
O auflösen
2
O lösen. Diese
2
O auf 100 ml
2
O
2
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