Systemkalibrierung - Cepheid Genexpert Dx System Handbuch

Die optischen Blöcke im I-CORE-Modul sind so angeordnet, dass ihre Aperturen auf den
optischen Fenstern der Reaktionsbehälter zu liegen kommen. Dieses Design ermöglicht
die Anregung des Reaktionsgemisches mit anschließender Detektion der emittierten
Fluoreszenz. Bei Verwendung von Sonden mit unterschiedlichen Fluoreszenz-
Reporterfarbstoffen können so in einem einzigen Reaktionsbehälter zeitgleich bis zu
zehn Zielsequenzen detektiert werden. Die Emissionsspektren von Fluoreszenzfarbstoffen
können sich überlagern. Entsprechend kann ein Farbstoff in mehr als einem Kanal Impulse
erzeugen. Das System kompensiert die Problematik der spektralen Überlagerung durch
eine entsprechende Kalibrierung und die Verwendung von Datenanalysealgorithmen, um
die Konzentration der verwendeten Reporterfarbstoffe zu ermitteln.
Anregungs- und Detektions-Spektralbänder der zehn Kanäle.
Tabelle 3-2. Anregungs- und Emissionsbereiche des GeneXpert Moduls (10-Farben)

3.8 Systemkalibrierung

Die Thermistoren der Thermoreaktionskammer sind mithilfe von auf das NIST
(National Institute of Standards and Technology) zurückverfolgbaren Standards auf
eine Genauigkeit von ±1,0 °C geeicht. Bei der Herstellung des Geräts wird die
Temperatur des Heizsystems bei zwei Temperaturen gemessen: 60 °C und 95 °C.
Kalibrierungskoeffizienten, die zur Korrektur geringer Abweichungen in den
Thermistor-Rohmesswerten an den Heizelementen benötigt werden, sind im
jeweiligen I-CORE-Modul gespeichert.
Das optische System wird mithilfe von Standardkonzentrationen individueller
ungequenchter, fluoreszierender Farbstoff-Oligos kalibriert. Für die Bestimmung der
spektralen Eigenschaften wird für jeden optischen Kanal das vom leeren Gefäß erzeugte
Signal (das Leersignal) vom Rohsignal des Farbstoffoligo-Standards abgezogen. Mithilfe
der individuellen spektralen Eigenschaften der reinen Farbstoff-Oligos können die
Signale einer unbekannten Mischung von Farbstoff-Oligos in korrigierte Signale für
die einzelnen Farbstoffe der Mischung getrennt werden.
Benutzerhandbuch für das GeneXpert Dx System
303-1548-DE Rev. A 2023-07
Optischer Kanal Anregung (nm)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Emission (nm)
375-405 420-480
450-495 510-535
500-550 565-590
555-590 606-650
630-650 665-685
630-650 >700
450-495 565-590
500-550 606-650
450-495 606-650
500-550 >700
Funktionsprinzip
Tabelle 3-2 zeigt die
3-9