Initiale Denaturierung; Denaturierung - Cepheid Genexpert Dx System Handbuch

Funktionsprinzip
Das GeneXpert Dx System verfügt über ein Heiz- und Gebläsekühlsystem, das I-CORE
Modul, zur Durchführung der Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion, mit der die
gewünschte DNA- bzw. cDNA-Sequenz des Organismus exponentiell amplifiziert
und nachgewiesen wird.
Die Polymerase-Kettenreaktion ist eine Amplifikationsmethode, die die Mengen an
bestimmten Kopien von DNA- bzw. cDNA-Sequenzen erhöht. Die Echtzeit-Polymerase-
Kettenreaktion arbeitet mit Fluoreszenz zum Nachweis bestimmter Sequenzen und
enthält einen Mechanismus zur Bestimmung des Zyklus, in dem erstmals eine
nennenswerte Anzahl an Kopien der gewünschten DNA bzw. cDNA vorkommt
(bezeichnet als „Schwellenwertzyklus").
Die Polymerase-Kettenreaktion besteht aus einer Reihe von Zyklen, während denen die
DNA bzw. cDNA eine bestimmte Zeit lang auf bestimmte Temperaturen erhitzt und
wieder abgekühlt wird.
Nach der initialen Denaturierung (wenn die Polymerase zur Amplifikation der DNA bzw.
cDNA aktiviert wird) läuft ein Zyklus ab, der – wie abgebildet – aus den folgenden drei
Schritten besteht:
1.
2.
3.
Abbildung 3-1. Schema eines Beispiel-PCR-Zyklus für das I-CORE Heiz- und Gebläsekühlmodul (Dauer der Temperaturphasen nicht maßstabsgerecht)

Initiale Denaturierung

95 °C
Abbildung 3-1. Schema eines Beispiel-PCR-Zyklus für das I-CORE Heiz- und Gebläsekühlmodul
3-2
Im Denaturierungsschritt werden die DNA-Stränge voneinander getrennt.
Im zweiten Schritt, dem Annealing (Primer-Anlagerung) wird ein Primer benötigt,
damit die Polymerase die DNA amplifizieren kann. Der Primer lagert sich bei
Komplementarität an die DNA- bzw. cDNA-Sequenzen an.
Im Elongationsschritt werden die DNA-Stränge aufgefüllt.

Denaturierung

95 °C
5 Sek.
120 Sek.
(Dauer der Temperaturphasen nicht maßstabsgerecht)
Annealing
60 °C
30 Sek.
Benutzerhandbuch für das GeneXpert Dx System
303-1548-DE Rev. A 2023-07
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Elongation
72 °C
10 Sek.