Werbung
Verfügbare Sprachen
Verfügbare Sprachen
FluorEScEranDE ana tEStProcEDur
rEkonStItutIon aV BuFFErt (PBS)
1.
Lös upp innehållet i en buffertpåse i en liter
avjoniserat eller destillerat vatten. PBS-
bufferten kan täckas och förvaras i 2-10° C i
maximalt fyra veckor.
SPäDnIng aV PatIEntProV
2.
Screening: Späd patientprovet till 1:40 ge-
nom att tillsätta 0,05 ml (50 µl) serum i 1,95
ml rekonstituerad PBS.
Semikvantitativ bestämning av antik-
roppnivå: Gör seriespädningar av screen-
ingprover (t ex 1:80, 1:160, 1:320...1:2560)
med användande av PBS.
IorDnIngStällanDE aV oBJEktglaS För
.
SuBStrat (20-25 µl/brunn)
Avlägsna objektglaset/objektglasen från
påsen/påsarna och placera kontrollsera på
kontrollserabrunnarna enligt följande: Vänd
upp och ned på pipettflaskan och kläm
försiktigt tills det syns en droppe på spetsen.
För försiktigt droppen mot rätt kontrollbrunn,
men undvik direktkontakt mellan pipett-
spetsen och objektglasets yta. Placera
den positiva kontrollen på den brunn som
är markerad "+", den negativa kontrollen
på den brunn som är markerad "-" och en
droppe PBS-buffert på den brunn som är
markerad "PBS". Tillsätt 1 droppe (20-25 µl)
patientprov i de numrerade brunnarna.
oBSErVEra: För allmän screening rek-
ommenderas den homogena positiva
kontrollen. För semikvantitativ bestämning
av antikroppnivå skall den positiva kontroll
väljas som åskådliggör det fluorescens-
mönster som är mest likt screeningprovet
(använd t ex den fläckiga positiva kontrol-
len för patientprover som ger ett fläckigt
fluorescensmönster i screening).
VarnIng: DIREKTKONTAKT MELLAN
PIPETTSPETSEN OCH OBJEKTGLASETS YTA
KAN LEDA TILL ATT ANTIGENSUBSTRATET TAR
SKADA.
4.
InkuBatIonSoBJEktglaS (30±5 minuter i
rumstemperatur, dvs 18-24° C)
Placera objektglaset/-n i en fuktig täckt
kammare (en petriskål med fuktad pap-
pershandduk duger). Odla, med locket på,
i 30 minuter (±5 minuter) i rumstemperatur
(18-24° C).
PBS-SkölJnIng
5.
Avlägsna objektglaset/-n från inkubator-
brickan och skölj hastigt med PBS genom
att använda en sprutflaska, Pasteur, eller
serologisk pipett. Spruta inte buffert direkt
på brunnarna.
oBSErVEra: För att undvika att objekt-
glasen korskontamineras kan du leda PBS-
strålen längs objektglasets mittlinje genom
att först luta objektglasen mot den övre
raden av brunnar och därefter mot den
nedre raden.
PBS-tVättnIng (tio minuter)
6.
Tvätta objektglaset/-n i tio minuter med PBS
i en objektglasfärgskål eller ett Coplin-kärl.
Försiktig omskakning rekommenderas vid
nedsänkningen av objektglaset, vid mitt-
punkten samt avlägsnandet. Tvättningen
kan förlängas med 10-30 minuter utan att
de slutliga testresultaten påverkas. Kassera
PBS-tvättlösningen efter användning.
För optimala resultat skall PBS ändras vid
mittpunkten och en magnetisk blandare
användas.
7.
FluorEScEranDE antIkroPPrEagEnS
(täck brunnarna med 12-14 droppar)
Avlägsna ett objektglas åt gången från PBS
och doppa det 3-5 gånger i avjoniserat
eller destillerat vatten. Knacka objektglaset
mot läskpapper eller pappershanddukar
för att avlägsna överskottsvatten. Återför
omedelbart objektglaset till inkubations-
kammaren och täck brunnarna helt med
fluorescerande antikroppreagens. Börja
med att placera en droppe över varje
brunn. Upprepa detta för varje objektglas.
Den fluorescerande antikroppreagensen
har titrerats för att kompensera för det
avjoniserade eller destillerade vatten som
är kvar på objektglaset efter sköljning.
oBSErVEra: Det är viktigt att objektglasb-
runnarna inte torkar under detta förfar-
ande, annars tar substratet skada.
TORKA ALDRIG OBJEKTGLASET MED LÄSK-
PAPPER ELLER ANNAT FÖREMÅL OCH LÅT
ALDRIG OBJEKTGLASET STÅ UTAN FLUO-
RESCERANDE ANTIKROPPREAGENS LÄNGRE
ÄN 15 SEKUNDER.
8.
InkuBatIon aV oBJEktglaS (30±5 minuter i
rumstemperatur, dvs 18-24 °C)
Placera locket på inkubationskammaren
och täck med en pappershandduk för
att förhindra att det utsätts för ljus, om
kammaren inte är ogenomskinlig. Odla
objektglaset/-n i 30 minuter (±5 minuter) i
rumstemperatur (18-24 °C).
9.
PBS-SkölJnIng
Avlägsna objektglaset/-n från inkubator-
brickan och skölj hastigt med PBS. Spruta
inte buffert direkt på brunnarna.
10. PBS-tVättnIng (tio minuter)
Tvätta objektglaset/-n i tio minuter med PBS
i en objektglasfärgskål eller ett Coplin-kärl.
Försiktig omskakning rekommenderas vid
nedsänkningen av objektglaset, dess mitt-
punkt samt vid avlägsnandet. Tvättningen
kan förlängas med 10-30 minuter utan att
de slutliga testresultaten påverkas, förutsatt
att motfärg inte används.
Tillhörande motfärg: (Katalognr 1105.
Bruksfärdig pipettampull innehållande 5,0
ml Evans blå lösning (0,5 % i PBS))
Tillsätt 5-10 droppar motfärg per 100 ml
PBS, innan objektglaset sänks ned. Eftersom
graden av önskad motfärgning kan variera
från person till person, går det att öka
respektive minska dess intensitet genom
att justera antalet droppar som tillsätts PBS i
denna tvättning.
11. montErIng aV SkYDDSrEmSa
Avlägsna ett objektglas åt gången från PBS
och doppa det 3-5 gånger i avjoniserat
eller destillerat vatten. Knacka objektglaset
mot läskpapper eller pappershandduk för
att avlägsna överskottsvatten.
TORKA ALDRIG OBJEKTGLASET MED LÄSK-
PAPPER ELLER ANNAT FÖREMÅL OCH LÅT
ALDRIG OBJEKTGLASET STÅ UTAN SKYDDS-
REMSA LÄNGRE ÄN 15 SEKUNDER. Tillsätt 4-5
droppar halvpermanent monteringsmedi-
um längs mittlinjen på varje objektglas. Sätt
försiktigt skyddsremsan på plats och undvik
luftfickor genom att försiktigt lägga ned
skyddsremsan från ena änden av objekt-
glaset till den andra.
oBSErVEra: Överflödigt monteringsmedium
på objektglaset kan leda till hög bakgr-
undsfluorescens på grund av ljusspridning
eller brist på klar upplösning av celler (oty-
dlig bild). Överflödigt monteringsmedium
kan avlägsnas från objektglaset genom
att skyddsremsan försiktigt torkas av med
läskpapper. Undvik att röra direkt vid skydd-
sremsan.
TEKNISK HJÄLP: +1-916- 363-2649
eller e-mail: techservice@immunoconcepts.com
38
Werbung
