Werbung
Verfügbare Sprachen
Verfügbare Sprachen
détermination de la positivité d'une dilution de sérum
donnée est l'apparition d'un motif clairement visible,
indépendamment de l'intensité de la fluorescence.
Ce contrôle titrable présentera l'image mouchetée typ-
ique associée aux anticorps RNP. On peut également
observer une seconde répartition de NSp I (plusieurs
mouchetures discrètes dans le noyau des cellules en in-
terphase), mais c'est l'image mouchetée RNP classique
qui doit être utilisée pour la lecture du résultat.
Les valeurs obtenues dans notre laboratoire peuvent
différer de vos propres valeurs. De nombreux facteurs
peuvent affecter vos résultats, notamment les éléments
suivants :
1. Type de source lumineuse utilisé. Les sources de
lumière au mercure génèreront une plus grande
énergie d'excitation à 495 nm que le quartz/
l'halogène. Les sources de lumière au mercure
50 watts, 100 watts et 200 watts diffèrent peu en
matière d'énergie d'excitation à 495 nm. Les sourc-
es de lumière au quartz/à l'halogène 100 watts
produiront une plus grande énergie d'excitation à
495 nm que le quartz/l'halogène 50 watts.
2. État et âge de la source lumineuse. Cela est
particulièrement vrai pour les sources de lumière au
mercure qui affichent généralement une réduction
progressive de l'énergie d'excitation à 495 nm
avant de griller. Cette réduction progressive peut
entraîner une perte de sensibilité significative au fil
des semaines. Ce problème peut être résolu par la
tenue d'un journal. Pour de meilleurs résultats, rem-
placer les ampoules au mercure de 50 watts toutes
les 100 heures et les ampoules au mercure de 100
ou 200 watts toutes les 200 heures. Les sources de
lumière au quartz/halogène n'affichent générale-
ment pas de réduction progressive de l'énergie
d'excitation avant de griller.
3. Type de filtre d'excitation utilisé. Les filtres
d'excitation interférentiels offrent une plus grande
sensibilité sur une longueur d'onde beaucoup plus
étroite que les filtres d'excitation absorbants. Se re-
porter au manuel du microscope à fluorescence ou
contacter le représentant pour plus d'informations.
4. Alignement correct de l'axe optique du micro-
scope. Pour les instructions, se reporter au manuel
du microscope à fluorescence.
5. Ouverture numérique de l'objectif. Grâce à la
lumière incidente (Epi), la fluorescence augmente
de manière exponentielle à mesure que l'ouverture
numérique (ON) de l'objectif augmente. Cela peut
conduire un objectif 40X avec une ON de 0,65 à lire
une ou plusieurs dilutions inférieures à un objectif
40X avec une ON de 0,85. L'ouverture numérique
est indiquée sur le côté de l'objectif.
6. Filtres de suppression. Les filtres de suppression
réduisent les longueurs d'onde d'excitation
spécifiques et peuvent être utilisés pour réduire la
sensibilité. Se reporter au manuel du microscope
à fluorescence ou contacter le représentant pour
plus d'informations.
7. Précision et exactitude de la technique de dilution,
de l'équipement et de la réalisation des procé-
dures de test.
IntErPrÉtatIon DES rÉSultatS Du PatIEnt
Un grossissement total de 200X est recommandé pour
le test positif/négatif tandis qu'un grossissement total de
400X est conseillé pour l'identification de divers motifs et
la visualisation des cellules mitotiques.
négatifs: Un sérum est considéré comme négatif aux
anticorps anti-nucléaires lorsque la fluorescence des
noyaux est inférieure ou égale à celle observée pour les
puits du contrôle négatif sans motif clairement visible.
Le cytoplasme peut présenter une légère fluorescence,
avec une fluorescence plus vive de la région non
chromosomique des cellules mitotiques, mais sans motif
nucléaire clairement visible.
Positifs: Un échantillon de sérum est considéré comme
positif lorsque le noyau présente un motif fluorescent
clairement visible pour une majorité de cellules inter-
phasiques.
titres: Lors de la lecture des titres, de nombreux
laboratoires commencent par lire le puits qui contient
l'échantillon le plus dilué puis poursuivent « à rebours
» jusqu'à la dilution 1:40. Le premier puits dans lequel
une image clairement perceptible est visible constitue
le résultat du titrage. Nous recommandons cette
technique pour la détermination des résultats du
titrage. Il est important de ne pas confondre intensité
de la fluorescence et présence ou absence d'anticorps
anti-nucléaires. Le facteur clé à prendre en compte
dans la détermination de la positivité d'une dilution
de sérum donnée est l'apparition d'un motif nucléaire
clairement visible, indépendamment de l'intensité de la
fluorescence.
attention: Certains sérums peuvent présenter une
fluorescence nucléaire et cytoplasmique sans motif
nucléaire apparent. Ce phénomène est généralement
attribué aux anticorps hétérophiles et doit être consi-
déré comme négatif (31).
IntEnSItÉ DE la FluorEScEncE
L'intensité fluorescente peut être semi-quantifiée à
l'aide des directives établies par le Centers for Disease
Control and Prevention (CDC), Atlanta (Georgie) pour
les réactifs immunofluorescents.
4+ Jaune-vert intense (fluorescence maximale):
contour net des cellules, centre de la cellule
parfaitement défini.
3+ Fluorescence jaune-vert moins intense: contour
net des cellules, centre de la cellule parfaitement
défini.
2+ Image cellulaire nette mais faible fluorescence:
contour des cellules moins bien défini.
1+ Fluorescence très voilée: dans la plupart des cas,
le contour des cellules ne peut quasiment pas
être distingué du centre.
Une lame standard pour la détermination de ces
intensités fluorescentes, FITC QC Slide™, référence
catalogue 1900, est disponible auprès d'Immuno
Concepts, N.A. Ltd.
communIcatIon DES rÉSultatS
test: Les résultats doivent être notés fortement positifs
ou positifs à la dilution 1:40 et le motif fluorescent du
noyau doit être communiqué.
titrage: Les résultats doivent être communiqués comme
la dernière des dilutions successives dans laquelle une
fluorescence est clairement visible. Les résultats présent-
ant une forte réaction à la dilution 1:2560 doivent être
notés supérieurs à 1:2560. Les titres allant de 1:40 à 1:80
sont considérés comme des titres faibles, ceux de 1:160
à 1:320 comme moyens et ceux supérieurs ou égaux à
1:640 comme élevés.
DÉtEctIon DES motIFS
Homogène: Fluorescence uniforme du noyau avec ou
sans effacement apparent des nucléoles. La région
chromosomique des cellules mitotiques en métaphase
est clairement positive avec une intensité de fluores-
cence lisse ou périphérique supérieure ou égale aux
noyaux interphasiques.
Synonymes: Diffuse, uniforme.
Antigènes nucléaires: ADN double brin, ADNn, DNP,
histone.
Associations cliniques: Les titres élevés suggèrent un
LED. Les titres plus faibles suggèrent un LED ou
d'autres collagénoses (32).
Périphérique: Fluorescence uniforme, principalement
autour de la région extérieure du noyau, avec une
fluorescence plus faible vers le centre du noyau. La
région chromosomique des cellules mitotiques en mé-
taphase est clairement positive avec une intensité de
fluorescence lisse ou périphérique supérieure ou égale
aux noyaux interphasiques.
Synonymes: Marginale, hérissée, membraneuse.
Antigènes nucléaires: ADN double brin, ADN simple
brin, ADNn, DNP, histone.
Associations cliniques: Les titres élevés suggèrent un
LED ; les titres plus faibles suggèrent un LED ou
d'autres collagénoses (32).
mouchetée: Fluorescence granulaire fine ou grossière
du noyau généralement sans coloration des nucléoles.
La région non chromosomique des cellules mitotiques
en métaphase présente une fluorescence, contraire-
ment à la région chromosomique (négative).
Antigènes nucléaires: Sm, RNP, Scl-70, SSA, SSB et
d'autres systèmes antigène-anticorps non encore
caractérisés.
Associations cliniques: Les titres élevés suggèrent un
LED (antigène Sm), une connectivité mixte (anti-
gène RNP), une sclérodermie (antigène Scl-70) ou
un syndrome de Goujerot-Sjögren (antigène SSA
ou SSB). Les titres plus faibles peuvent suggérer
d'autres collagénoses (33).
11
Werbung
