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SIStEmaS DE análISIS DE ana Por
InmunoFluorEScEncIa
Para uso diagnóstico in vitro
USO PREVISTO: Se trata de una determinación
indirecta por inmunofluorescencia para la detección
semicuantitativa de anticuerpos antinucleares
(ANA) en suero humano. Este sistema de análisis
ha de emplearse como ayuda en la detección de
anticuerpos asociados a las enfermedades reumáticas
sistémicas.
rESumEn Y EXPlIcacIón DE la PruEBa
Anticuerpo antinuclear (ANA) es un término general
que se emplea para referirse a los autoanticuerpos
dirigidos contra diversas proteínas del núcleo celular.
En los primeros estudios sobre estos autoanticuerpos,
realizados con técnicas de inmunofluorescencia, se
observaron determinados detalles de unas pocas
proteínas del núcleo (1). A la vista de la elevada
correlación entre la presencia de ANA y el lupus
eritematoso sistémico (LES), basta con que no estén
presentes para descartar la enfermedad (2).
Aunque los anticuerpos específicos del ADN siguen
mostrando una elevada correlación con el LES (3),
también se han detectado algunas macromoléculas
nucleares (4) y citoplásmicas (5-7) asociadas a otras
enfermedades del tejido conjuntivo (8-10). Parece que
algunos de estos autoanticuerpos tienen un significado
diagnóstico y/o pronóstico en la esclerosis sistémica
progresiva (11-12), las enfermedades mixtas del tejido
conjuntivo (13-15), el síndrome de Sjögren (16-17), la
polimiositis (18) y/o la artritis reumatoide (19). Debido a
estas asociaciones a enfermedades, en la actualidad
se considera que la detección de ANA constituye una
herramienta general para la detección selectiva de las
enfermedades del tejido conjuntivo (20).
La sensibilidad de la prueba varía con el tipo de
sustrato utilizado, el procedimiento de fijación y los
tipos de ANA presentes en los sueros. Por lo general,
los sustratos de cultivos celulares muestran mayor
sensibilidad que los cortes de tejido (21-24). El sistema
de análisis de ANA de Immuno Concepts con células
epitelioides humanas (HEp-2) mitóticas* representa
un avanzado sistema de inmunofluorescencia para
la detección de ANA. Se ha demostrado que las
células HEp-2 con figuras mitóticas son más sensibles
y proporcionan un modelo de reconocimiento más
preciso que el clásico sustrato de riñón de ratón,
para detectar anticuerpos en la esclerosis sistémica
progresiva (ESP) (25). Las figuras mitóticas mejoran
el reconocimiento diferencial del modelo y ayudan
a detectar antígenos nucleares no notificados
anteriormente, que alcanzan concentraciones
superiores en las células que se encuentran en mitosis
(26-28).
*Mitosis es un término que se emplea para describir el
proceso de división de las células. En general, se divide
en seis fases, a saber, interfase, profase, metafase,
anafase, telofase y citocinesia.
PrIncIPIo DE la PruEBa
El sistema de análisis de ANA por inmunofluorescencia
de IC emplea la técnica indirecta de anticuerpos
fluorescentes descrita por primera vez por Weller y
Coons (29). Las muestras de pacientes se incuban con
un sustrato antigénico que permite la unión específica
de los autoanticuerpos a los núcleos de las células. Si
hay ANA, se forma un complejo antígeno-anticuerpo
estable. Tras el lavado para retirar los anticuerpos
unidos de forma inespecífica, se incuba el sustrato
con anticuerpos antihumanos conjugados con
fluoresceína. Si los resultados son positivos, se forma
un complejo estable con tres partes: el anticuerpo
fluorescente unido al anticuerpo antinuclear humano,
unido a su vez al antígeno nuclear. Este complejo se
puede visualizar con la ayuda de un microscopio de
fluorescencia. En las muestras positivas, los núcleos
celulares mostrarán una fluorescencia de color verde
manzana, con un patrón de tinción característico
de la particular distribución del antígeno nuclear en
las células. Si no hay ANA en las muestras, el núcleo
no presentará un patrón de fluorescencia nuclear
claramente discernible.
comPonEntES DEl SIStEma
SumInIStraDoS)
utilización: Todos los componentes se entregan listos
para su empleo, sin necesidad de fragmentarlos ni
prepararlos (excepto el tampón PBS, que debe ser
(matErIalES
disuelto en agua desionizada o destilada antes de
utilizarlo).
conservación: Todos los componentes se pueden
conservar en refrigerador a 2-10 ºC.
Una vez preparado, el tampón PBS debe conservarse
en envases con tapón de rosca, en refrigerador a 2-
10ºC.
Estabilidad: Todos los componentes son estables
al menos durante 12 meses a partir de la fecha de
fabricación. No utilice los componentes pasada la
fecha de caducidad.
rEactIVoS
Portaobjetos de sustrato: †Nº de catálogo 2007 (siete
pocillos); 2013 (trece pocillos). Portaobjetos con siete
o trece pocillos con sustrato para ANA con células
HEp-2 (con figuras mitóticas) cultivadas y estabilizadas
directamente en los pocillos del análisis. El exclusivo
diseño de los fosos del portaobjetos reduce al mínimo
la contaminación cruzada de los pocillos durante la
prueba. Además, los portaobjetos llevan pocillos de
control designados como positivo, negativo y PBS, que
ayudan a interpretar adecuadamente los resultados.
La bolsa que contiene el portaobjetos se rellena con
un gas inerte no tóxico que contribuye a la estabilidad
de las células. Si la bolsa no está inflada al sacar
el portaobjetos del kit, significa que la bolsa se ha
estropeado y el portaobjetos no debe ser utilizado.
control positivo homogéneo: Nº de catálogo 2021.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene
1,0 ml de suero de control humano positivo con
anticuerpo específico contra el ADN y/o los antígenos
nucleares DNP. Este suero da una reacción de tinción
homogénea con el sustrato de células HEp-2 de IC. La
región cromosómica de las células mitóticas muestra la
misma reacción de tinción homogénea.
control positivo moteado: Nº de catálogo 2022.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5
ml de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra el Sm y/o los antígenos nucleares
RNP. Este suero da una de las reacciones de tinción
moteada más habituales que se observan con el
sustrato de células HEp-2 de IC. La región cromosómica
de las células mitóticas muestra una reacción de
tinción negativa.
control positivo nucleolar: Nº de catálogo 2023.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5
ml de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra los antígenos del nucléolo. Este suero
da una reacción de tinción nucleolar con el sustrato de
células HEp-2 de IC.
control positivo del centrómero: Nº de catálogo 2025.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene 0,5
ml de suero de control humano positivo con anticuerpo
específico contra los centrómeros cromosómicos
(cinetocoro). Este suero da una discreta reacción de
tinción moteada con el sustrato de células HEp-2 de IC.
La región cromosómica de las células mitóticas muestra
la misma reacción discreta de tinción moteada.
Suero de control titulable: Nº de catálogo 2026.
Vial listo para usar, que contiene 1,0 ml de suero de
control humano positivo que será tratado como si fuera
una muestra de paciente sin diluir. Consulte el valor de
la titulación en la etiqueta del vial.
Suero de control negativo: Nº de catálogo 2031.
Vial con cuentagotas listo para usar, que contiene
1,0 ml de suero de control humano negativo. Aunque
el suero de control negativo puede dar cierta
fluorescencia del citoplasma al teñirse de forma
más brillante la región no cromosómica de la célula
mitótica, no presenta un patrón de tinción nuclear
discernible.
Reactivo con anticuerpos fluorescentes: Nº de
catálogo 2009 (9,0 ml), 2075 (23 ml). IgG de cabra
antihumana (cadenas pesadas y ligeras) conjugada
con fluoresceína isotiocianato (FITC). El reactivo se
presenta listo para usar en frascos con cuentagotas de
precisión, con 9,0 ml por cada 10 portaobjetos, en kits
de análisis completos.
†Este portaobjetos está protegido por una o más de las
siguientes patentes estadounidenses y de otros países:
4387972; D-274261; D-273261; patente canadiense
1171302, y otras patentes en trámite.
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