Werbung
Verfügbare Sprachen
Verfügbare Sprachen
FluorEScEranDE ana tEStSYStEm
För DIagnoStISk anVänDnIng
AVSEDD ANVÄNDNING: Det här är ett fluorescerande
antikroppstest för halvkvantitativ detektion av
antinukleär antikropp i humanserum. Detta testsystem
skall användas som ett hjälpmedel för detektion
av antikroppar som är associerade med systemiska
reumatiska sjukdomar.
SammanFattnIng ocH FörklarIng aV tEStEt
Antinukleär antikropp (ANA) är en allmän term
som används för att beskriva autoantikroppar mot
olika cellnukleära proteiner. Tidiga studier av dessa
autoantikroppar med hjälp av immunofluorescerande
teknik påvisar ett fåtal utvalda nukleärproteinspecificit
eter (1). Tack vare det höga sambandet mellan positiv
ANA och systemisk lupus erytematosus (SLE) utesluter
negativ ANA i huvudsak sjukdomen (2).
Även om DNA-specifika antikroppar har ett
högt sjukdomssamband med SLE (3), har även
ett antal nukleära (4) och cytoplasmiska (5-7)
makromolekyler upptäckts som associerats med andra
bindvävssjukdomar (8-10). Vissa av dessa antikroppar
visar sig ha diagnostisk och/eller prognostisk betydelse
för progressiv systemisk skleros (11-12), blandad
bindvävssjukdom (13-15) Sjögrens syndrom (16-17),
polymyositis (18), och/eller reumatoid artrit (19). Tack
vare dessa sjukdomsassociationer har ANA-testning
nu erkänts som ett allmänt screeningredskap för
bindvävssjukdom (20).
ANA-testkänsligheten varierar beroende på vilken
typ av substrat och vilka fixativprocedurer som
används samt vilka ANA-typer som finns i sera.
Cellkultursubstrat visar i allmänhet större känslighet än
vävnadssektioner (21-24). Immuno Concepts ANA-
testsystem med mitotiska* humanepiteloidceller (HEp-2)
är ett avancerat immunofluorescerande system för
detektion av ANA. HEp-2-celler med mitotiska former
har visats sig ha större känslighet och ger skarpare
mönsterigenkänning än klassiskt musnjuresubstrat
för detektion av antikroppar vid progressiv systemisk
skleros (PSS) (25). mitotiska former gör det lättare att
känna igen olika mönster och att upptäcka tidigare
orapporterade nukleära antigener som förekommer i
högre koncentrationer i mitotiskt aktiva celler (26-28).
* Mitos är en term som används för att beskriva
celldelningsprocessen. Den delas vanligtvis upp i sex
faser, interfas, profas, metafas, anafas, telofas och
cytokines.
tEStPrIncIP
Immuno Concepts fluorescerande ANA-testsystem
använder den indirekta fluorescerande antikroppteknik
som först beskrivits av Weller och Coons (29).
Patientproverna odlas med antigensubstrat för
att tillåta specifik bindning av autoantikroppar till
cellkärnorna. Om ANA förekommer bildas ett stabilt
antigen/antikroppkomplex. Efter tvättning för att
avlägsna obundna antikroppar odlas substratet med
en antihuman antikropp konjugerad med fluoroscein.
Om resultatet är positivt bildas ett stabilt komplex i
tre delar bestående av en fluorescerande antikropp
bunden till en human antinukleär antikropp, som i sin tur
är bunden till en nukleär antigen. Detta komplex kan
betraktas i fluorescerande mikroskop. I positiva prover
uppvisar cellkärnorna en äppelgrön fluorescens med
ett färgmönster som är karaktäristiskt för den aktuella
nukleära antigendistributionen i cellerna. Om provet
är ANA-negativt, uppvisar cellkärnan inte något klart
urskiljningsbart mönster av nukleär fluorescens.
SYStEmkomPonEntEr
användning: Alla komponenter levereras bruksfärdiga
utan krav på delning eller rekonstitution (förutom
PBS-bufferten som måste lösas upp i avjoniserat eller
destillerat vatten före användning).
Förvaring: Alla komponenter kan förvaras i kylskåp i
2-10 °C. Efter rekonstitution skall PBS-bufferten förvaras i
skruvlockbehållare under kylning i 2-10 °C.
Stabilitet: Komponenterna är stabila i minst tolv
månader från tillverkningsdatum. Använd ingen
komponent efter dess utgångsdatum.
rEaktIVa rEagEnSEr
objektglas för substrat: †Katalognr 2007 (sjubrunnars);
2013 (trettonbrunnars). Sju- eller trettonbrunnars ANA-
in vitro
(matErIal Som Ingår)
objektglas för substrat som använder HEp-2-celler
(med mitotiska former) som odlats och stabiliserats
direkt på testbrunnarna. Ett unikt vallgravsformat
objektglas minimerar korskontamination mellan
brunnarna under analysen. Objektglasen inkluderar
även extra kontrollbrunnar som är positivt eller negativt
betecknade samt PBS för att underlätta korrekt tolkning
av resultatet. Objektglaspåsen är fylld med en stabil
giftfri gas som bidrar till cellernas stabilitet. Om påsen
inte verkar vara fylld när objektglaset avlägsnas från
satsen är påsen skadad, och objektglaset skall då inte
användas.
Homogen positiv kontroll: Katalognr 2021.
Bruksfärdig pipettampull innehållande 1,0 ml positivt
humankontrollserum med antikropp som är specifik
för DNA och/eller DNP-nukleära antigener. Serumet
uppvisar en homogen färgreaktion med Immuno
Concepts HEp-2-cellsubstrat. Kromosomområdet i
de mitotiska cellerna uppvisar samma homogena
färgreaktion.
Fläckig positiv kontroll: Katalognr 2022. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 0,5 ml positivt
humankontrollserum med antikropp som är specifik
för Sm och/eller RNP-nukleära antigener. Serumet
uppvisar en av de mest vanliga fläckiga färgreaktioner
som setts med Immuno Concepts HEp-2-cellsubstrat.
Kromosomområdet i de mitotiska cellerna uppvisar en
negativ färgreaktion.
nukleolär positiv kontroll: Katalognr 2023.
Bruksfärdig pipettampull innehållande 0,5 ml positivt
humankontrollserum med antikropp som är specifik för
nukleolära antigener. Serumet uppvisar en nukleolär
färgreaktion med Immuno Concepts HEp-2-cellsubstrat.
centromer positiv kontroll: Katalognr 2025.
Bruksfärdig pipettampull innehållande 0,5 ml positivt
humankontrollserum med antikropp som är specifik
för kromosomala centromerer (kinetochore). Serumet
uppvisar en åtskiljd fläckig färgreaktion med Immuno
Concepts' HEp-2-cellsubstrat. De mitotiska cellernas
kromosomområde uppvisar samma åtskiljda fläckiga
färgreaktion.
titrerbart kontrollserum: Katalognr 2026: Bruksfärdig
ampull innehållande 1,0 ml positivt humankontrollserum
som skall behandlas som ett outspätt patientprov
Se ampullens etikett för information om
antikroppnivåvärde.
negativt kontrollserum: Katalognr 2031. Bruksfärdig
pipettampull innehållande 1,0 ml negativt
humankontrollserum. Även om det negativa
kontrollserumet kan uppvisa svag fluorescens av
cytoplasmat med ljusare färgning av den mitotiska
cellens icke-kromosomområde, uppvisar det inget
urskiljningsbart nukleärt färgningsmönster.
Fluorescerande antikroppreagens: Katalognr 2009
(9,0 ml), 2075 (23 ml). Getantihuman IgG (tunga
och lätta kedjor) konjugerade med fluorescein
isotiocyanat (FITC). Reagensen levereras bruksfärdig
i precisionspipettflaskor med 9,0 ml för vart tionde
objektglas i kompletta testsatser.
†Detta objektglas är skyddat genom ett eller flera av
följande amerikanska eller utländska patent: 4387972;
D-274261; D-273261, kanadensisk patent 1171302 och
övriga inplanerade patent.
IckE-rEaktIVa rEagEnSEr
PBS buffertpulver: Katalognr 1011. Fosfatbuffrat
saltlösningspulver (0,01 M, pH 7,4 ± 0.2). Varje påse
innehåller tillräckligt med buffertpulver för att ge 1
liter. (En påse buffertpulver levereras för vart femte
objektglas i kompletta testsatser).
Framställning: Lös upp en påse buffertpulver i 1 liter
avjoniserat eller destillerat vatten, täck och förvara
i kylskåp i 2-10° C i upp till fyra veckor, eller tills det
syns tecken på kontamination eller andra synliga
förändringar.
Halvpermanent monteringsmedium: Katalognr
1111. Bruksfärdig pipettampull innehållande 5,0 ml
glycerolbaserat monteringsmedium.
Skyddsremsor: Katalog nr 1041. Varje bunt innehåller tio
24 x 60 mm skyddsremsor nr 1 av glas.
Werbung
