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muestra, utilizando esta información para evaluar la
reproducibilidad (precisión) de unos ciclos a otros.
Mediante la reiterada evaluación de este control
titulable utilizando el sistema de análisis de ANA por
inmunofluorescencia de Immuno Concepts, se ha
establecido un título medio para cada número de lote.
El número de lote, el título medio y el rango de títulos (±
una dilución doble a cada lado de la media) figuran
en la etiqueta del vial y deben servir como guía para el
funcionamiento del sistema de análisis.
Es importante no confundir la intensidad de la
fluorescencia con la presencia o ausencia de
anticuerpos antinucleares. La clave para determinar si
una dilución de suero es positiva radica en la aparición
de un patrón claramente discernible, sea cual sea la
intensidad de la tinción fluorescente.
Este control titulable mostrará el típico patrón moteado
que se asocia al anticuerpo RNP. También puede
aparecer un segundo patrón de NSp I (varias manchas
aisladas en el núcleo de las células que se encuentran
en la interfase); pero el patrón que se empleará
como criterio de valoración será el típico moteado
correspondiente a RNP.
Puede que los valores obtenidos en nuestro laboratorio
difieran de los suyos. He aquí algunos de los muchos
factores que pueden afectar a sus resultados:
1. El tipo de luz utilizada. Las fuentes de luz de mercu-
rio producen una energía de excitación a 495 mm
mayor que las de cuarzo/halógenas. Las fuentes
de luz de mercurio de 50, 100 y 200 vatios difieren
poco en la energía de excitación a 495 mm. Las
fuentes de luz de cuarzo/halógenas de 100 vatios
producen una energía de excitación a 495 mm
superior a la proporcionada por las de cuarzo/
halógenas de 50 vatios.
2. El estado de la fuente de luz y su edad. Esto es
especialmente cierto para las fuentes de luz de
mercurio, que suelen experimentar una reduc-
ción gradual de la energía de excitación a 495
mm antes de agotarse. Esta gradual reducción
de la energía de excitación puede producir una
pérdida significativa de la sensibilidad en un plazo
de semanas. El problema se puede evitar con un
registro cronológico. Para que los resultados sean
óptimos, cambie las bombillas de mercurio de 500
vatios cada 100 horas, y las de 100 ó 200 vatios
cada 200 horas. Por lo general, las fuentes de luz
de cuarzo/halógenas no experimentan una reduc-
ción gradual de la energía de excitación antes de
agotarse.
3. El tipo de filtro excitador utilizado. Los filtros excita-
dores por interferencia proporcionan mayor sensibi-
lidad en una longitud de onda mucho menor que
los filtros excitadores por absorción. Si desea más
información, consulte el manual de su microscopio
de fluorescencia, o con su delegado de ventas.
4. Correcta alineación del haz de luz del microscopio.
Consulte las instrucciones del manual del microsco-
pio de fluorescencia.
5. La apertura numérica del objetivo. Si se emplea
fluorescencia por luz incidente (EPI), la fluorescen-
cia aumenta exponencialmente con la apertura
numérica (NA) del objetivo. Así, puede que un
objetivo de 40X con una NA de 0,65 interprete una
o más diluciones como inferiores a las determina-
das con un objetivo de 40X con una NA de 0,85.
La apertura numérica va impresa a un lado del
objetivo.
6. Filtros de supresión. Los filtros de supresión reducen
longitudes de onda de excitación concretas, y
se pueden utilizar para reducir la sensibilidad. Si
desea más información, consulte el manual de su
microscopio de fluorescencia, o con su delegado
de ventas.
7. Precisión y exactitud de la técnica de dilución, del
equipo y de la realización de los procedimientos
de análisis.
IntErPrEtacIón DE loS rESultaDoS DEl
PacIEntE
Se recomienda un aumento total de 200X para la
detección selectiva de positivos y negativos, y de 400X
para el reconocimiento de patrones y la visualización
de células mitóticas.
negativos: Se considera que un suero es negativo para
la presencia de anticuerpos antinucleares si la tinción
es igual o inferior a la del pocillo de control negativo,
sin patrón claramente discernible. Puede que el
citoplasma muestre una tinción débil, más brillante en
la región no cromosómica de las células mitóticas, pero
sin patrón nuclear claramente discernible.
Positivos: Se considera que un suero es positivo si el
núcleo muestra un patrón de tinción claramente
discernible en una mayoría de las células que se
encuentran en la interfase.
títulos: Para interpretar los títulos, muchos laboratorio
empiezan por el pocillo que contiene la muestra
más diluida, y van "hacia atrás" hasta la dilución 1:
40. El primer pocillo en el que se aprecia un patrón
discernible corresponde al título que se considera
como criterio de valoración. Recomendamos
utilizar esta técnica para determinar los criterios de
valoración de los títulos. Es importante no confundir la
intensidad de la tinción con la presencia o ausencia de
anticuerpos antinucleares. La clave para determinar si
una determinada dilución de suero es positiva radica
en la aparición de un patrón claramente discernible,
sea cual sea la intensidad de la tinción.
Precaución: Algunos sueros pueden presentar tinción
en núcleos y citoplasmas sin patrón nuclear evidente.
Este fenómeno suele deberse a los anticuerpos
heterófilos, y se considerará resultado negativo (31).
IntEnSIDaD DE la FluorEScEncIa
Es posible semicuantificar la intensidad de la
fluorescencia con arreglo a las directrices sobre
reactivos con anticuerpos fluorescentes establecidas
por los Centers for Disease Control and Prevention,
Atlanta, Georgia (CDC).
4+ Verde manzana brillante (fluorescencia máxima):
perfil celular claramente definido; centro celular
claramente definido.
3+ Fluorescencia de color verde manzana menos
brillante: perfil celular claramente definido; centro
celular claramente definido.
2+ Patrón celular definido, pero fluorescencia tenue:
perfil celular menos definido.
1+ Fluorescencia muy leve: perfil celular prácti-
camente indistinguible del centro celular en la
mayor parte de los casos.
Immuno Concepts, N.A. Ltd. facilita un portaobjetos
estándar para la determinación de la intensidad de
la fluorescencia, FITC QC Slide™, número de catálogo
1900.
notIFIcacIón DE loS rESultaDoS
Selección: Los resultados deben ser notificados como
muy positivos o positivos en la dilución 1:40; y hay que
informar del patrón de tinción del núcleo.
titulación: El resultado que se notifica es el de la última
dilución en la que se observa una tinción claramente
discernible. Si el resultado se observa con la dilución 1:
2560, se notificará como superior a 1:2560. Los títulos
de 1:40 a 1:80 se consideran bajos; de 1:160 a 1:320,
medios; y de 1:640 en adelante, elevados.
DEtEccIón DEl Patrón
Homogéneo: Tinción sólida del núcleo, con o sin
enmascaramiento evidente de los nucléolos. La región
cromosómica de las células mitóticas en metafase es
claramente positiva, con una intensidad de la tinción
suave o periférica superior o igual a la de los núcleos
en interfase.
Sinónimos: Difuso; sólido.
Antígenos nucleares: ADNbc; ADNn; DNP; histona.
Asociación a enfermedades: Los títulos elevados
sugieren LES. Los títulos bajos sugieren LES u otras
enfermedades del tejido conjuntivo (32).
Periférico: Tinción sólida, sobre todo alrededor de la
región externa del núcleo, con tinción más débil del
centro de éste. La región cromosómica de las células
mitóticas en metafase es claramente positiva, con una
intensidad de la tinción suave o periférica superior o
igual a la de los núcleos en interfase.
Sinónimos: Borde, áspero, membranoso.
Antígenos nucleares: ADNbc, ADNmc, ADNn, DNP,
histona.
Asociación a enfermedades: Los títulos elevados
sugieren LES; los títulos bajos sugieren LES u otras
enfermedades del tejido conjuntivo (32).
moteado: Tinción granular áspera o fina del núcleo,
generalmente sin tinción fluorescente de los nucléolos.
La región no cromosómica de las células mitóticas en
metafase se tiñe, mientras que la región cromosómica
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