Werbung
Verfügbare Sprachen
Verfügbare Sprachen
sultat: Byt ut 50 watts glödlampor av kvicksilver efter
100 timmar och 100 eller 200 watts glödlampor av
kvicksilver efter 200 timmar. Kvarts-/halogenljuskällor
uppvisar i allmänhet ingen gradvis minskning i
exciteringsenergin, innan de smälter ned.
3. Vilken typ av matarfilter som används. Störnings-
matarfilter ger större känslighet över en mycket
smalare våglängd än absorptionsmatarfilter. Se
bruksanvisningen till det fluorescerande mikroskopet
eller kontakta säljaren för mer information.
4. Korrekt placering av mikroskopets ljusbana. Se
bruksanvisningen till det fluorescerande mikroskopet
för mer information.
5. Objektivets numeriska bländaröppning. Med infal-
lande ljusfluorescens (Epi) ökar fluorescensen expo-
nentiellt, medan den numeriska bländaröppningen
(NA) ökar additivt. Detta kan leda till att ett 40
gångers objektiv med en NA på 0,65 läser en eller
flera spädningar lägre än ett 40 gångers objektiv
med en NA på 0,85. Den numeriska bländaröppnin-
gen står angiven på sidan av objektivet.
6. Spärrfilter. Spärrfiltret minskar de specifika exciter-
ingsvåglängderna och kan användas för att
minska känsligheten. Se bruksanvisningen till det
fluorescerande mikroskopet eller kontakta säljaren
för mer information.
7. Precision och exakthet i spädningsteknik, utrustning
och testmetodernas utförande.
tolknIng aV tEStrESultatEn
200 gångers total förstoring rekommenderas för
screening av positiv/negativ, medan 400 gångers total
förstoring rekommenderas för mönsterigenkänning och
på visning av mitotiska celler.
negativt: Ett serum betraktas som negativt för
antinukleära antikroppar, om nukleärfärgningen är
mindre än eller lika med den negativa kontrollbrunnen
utan klart urskiljningsbart mönster. Cytoplasman kan
uppvisa en svag färgning, med tydligare färgning i de
mitotiska cellernas icke-kromosomområde, men utan
ett klart urskiljningsbart nukleärt mönster.
Positivt: Ett serum betraktas som positivt om kärnan
uppvisar ett klart urskiljningsbart mönster av färgning i
flertalet interfasceller.
antikroppnivåer: Vid avläsning av antikroppnivåer
börjar många laboratorier med att läsa den brunn
som innehåller det mest spädda provet och läser
"baklänges" till spädningen 1:40. Den första brunnen
med ett klart urskiljningsbart mönster är antikroppnivåns
ändpunkt. Vi rekommenderar denna metod för att
fastställa antikroppsnivåns ändpunkter. Det är viktigt att
inte blanda ihop färgningens intensitet med eventuell
förekomst av antinukleära antikroppar. Den viktigaste
faktorn för fastställande om en given serumspädning är
positiv eller inte är om det finns ett klart urskiljningsbart
nukleärt mönster, oavsett färgningens intensitet.
Varning: Vissa sera kan uppvisa nukleär och
cytoplasmisk färgning utan ett synbart nukleärt
mönster. Detta fenomen beror i allmänhet på heterofila
antikroppar, och bör rapporteras som negativt (31).
FluorEScEnSEnS IntEnSItEt
Fluorescensens intensitet kan semikvantifieras enligt de
riktlinjer för fluorescerande antikroppreagenser som
Centralerna för kontroll och förebyggande av sjukdom,
Atlanta, Georgia, USA (CDC) har fastställt.
4+ Lysande gulgrön (maximal fluorescens): Tydlig
cellkontur. Klart definierat cellcentrum.
3+ Mindre lysande gulgrön fluorescens: Tydlig cell-
kontur. Klart definierat cellcentrum.
2+ Avgränsat cellmönster, men svag fluorescens:
Cellkonturen mindre väldefinierad.
1+ Mycket dämpad fluorescens: Cellkonturen är i
de flesta fall nästan omöjlig att skilja från cellens
centrum.
Ett standardobjektglas för fastställande av
fluorescensens intensitet, FITC QC Slide™,
katalognummer 1900, kan beställas från Immuno
Concepts, N.A. Ltd.
raPPortErIng aV rESultatEt
Screening: Resultatet skall rapporteras som starkt
positivt eller positivt vid spädning 1:40, och det nukleära
färgmönstret skall rapporteras.
Bestämning av antikroppnivå: Resultatet skall
rapporteras som den sista seriespädningen med klart
urskiljningsbar färgning. Resultat med en stark reaktion
vid spädning 1:2560 skall rapporteras som större än
1:2560. Antikroppnivåer på 1:40 till 1:80 betraktas
som låga. 1:160 till 1:320 betraktas som medelhöga
antikroppnivåer, och 1:640 och mer betraktas som
höga.
mönStErDEtEktIon
Homogen: En fast färgning av kärnan med eller utan
synbar maskering av nukleolerna. De metafasmitotiska
cellernas kromosomområde är klart positivt med en
jämn eller perifer färgningsintensitet större än, eller lika
med, interfaskärnornas.
Synonymer: Diffus, fast.
Nukleära antigener: dsDNA, nDNA, DNP, histon.
Sjukdomssamband: Höga antikroppnivåer tyder på
SLE. Låga antikroppnivåer tyder på SLE eller an-
nan bindvävssjukdom (32).
Perifer: En fast färgning, främst runt kärnans yttre
ring, med svagare färgning mot dess mitt. De
metafasmitotiska cellernas kromosomområde är klart
positivt med en jämn eller perifer färgningsintensitet
större än, eller lika med, interfaskärnornas.
Synonymer: Kantig, raggig, hinnaktig.
Nukleära antigener: dsDNA, ssDNA, nDNA, DNP,
histon.
Sjukdomssamband: Höga antikroppnivåer tyder på
SLE. Lägre antikroppnivåer tyder på SLE eller an-
nan bindvävssjukdom (32).
Fläckig. En grov- eller finkornig färgning av kärnan i
allmänhet utan fluorescerande färgning av nukleolerna.
De metafasmitotiska cellernas icke-kromosomområde
uppvisar färgning, medan kromosomområdet är
negativt på färg.
Nukleära antigener: Sm; RNP; Scl-70; SSA; SSB och
andra antigen-/antikroppsystem som ännu inte är
karaktäriserade.
Sjukdomssamband: Höga antikroppnivåer tyder på
SLE (Sm-antigen), blandad bindvävssjukdom
(RNP-antigen), sklerodermia (Scl-70-antigen) eller
Sjögrens syndrom, även kallat Sicca-syndromet
(SSA- eller SSB-antigen). Lägre antikroppnivåer
kan tyda på annan bindvävssjukdom (33).
nukleolär: Stor, grovfläckig färgning inuti kärnan, i
allmänhet mindre än sex stycken per cell, med eller
utan enstaka fina fläckar, 5-10 stycken till antalet. De
metafasmitotiska cellernas icke-kromosomområde
uppvisar stark färgning, medan kromosomområdet
uppvisar svag färgning. Anafasa och telofasa celler kan
uppvisa liknande färgning som interfaskärnorna.
Nukleära antigener: Benämns allmänt 4-6s RNA och
andra nukleära antigener, t ex fibrillarin, RNA
polymeras I, NOR 90 och PM/Scl.
Sjukdomssamband: Höga antikroppnivåer vid sklero-
dermia och Sjögrens syndrom (34).
centromer: Ett enstaka fläckigt färgmönster som i hög
grad tyder på CREST*-syndromvarianten av progressiv
systemisk skleros (25). De nukleära fläckarna är mycket
åtskiljda och är vanligtvis någon multipel av 46
(oftast 23-46 fläckar per kärna). Eftersom centromerer
är sammandragningar där spindelfibrer binds till
kromosomerna, uppvisar de mitotiska cellerna samma
fläckreaktion i kromosomområdet (12).
Synonymer: ACA, åtskiljt fläckig.
Nukleära antigener: Kromosom centromer (kineto-
chore).
Sjukdomssamband: Tyder i hög grad på CREST*-syn-
dromvarianten av progressiv systemisk skleros (25).
*CREST är en form av PSS med framskriden kalcinos,
Raynaud-fenomen, esofageal dysfunktion,
sklerodactylo och telangiektasi.
mItotISka cEllEr
DEtEktIon
Mitotiska celler bör kunna synas på varje fält, när man
betraktar dem i minst 200 gångers förstoring. Granska
cellen i 400 gångers förstoring för att verifiera om den
befinner sig i mitos. Mitotiska celler har en karaktäristisk
rund form utan detekterbart nukleärt membran.
Kromosomområdet i mitotiska celler har i allmänhet en
oregelbunden form inuti cellen på grund av bristande
nukleärmembran och extrem sammandragning av
kromosomerna.
Sera som är positivt för DNA, DNP och/eller histon
(exempelvis Immuno Concepts homogena positiva
kontroll) uppvisar ljus färgning i sådana cellers
kromosomområde. I prover som är negativa för DNA,
35
Werbung
