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nucléolaire: Large fluorescence mouchetée grossière
dans le noyau, en général moins de 6 par cellule, avec
ou sans fines mouchetures occasionnelles (entre 5 et
10). La région non chromosomique des cellules mito-
tiques en métaphase présente une forte fluorescence,
contrairement à la région chromosomique (faible
fluorescence). Les cellules en anaphase et télophase
peuvent présenter une fluorescence similaire à celles
des noyaux interphasiques.
Antigènes nucléaires: Généralement appelés ARN
4-6S et autres antigènes nucléaires tels que fibril-
larine, ARN polymérase I, NOR 90 et PM/Scl.
Associations cliniques: Titres élevés prévalant dans la
sclérodermie et le syndrome de Sjögren (34).
centromérique: Image fluorescente mouchetée
discrète suggérant fortement un syndrome CREST*,
variante de la sclérodermie (25). Les mouchetures
nucléaires sont très discrètes et généralement par
multiples de 46 (généralement 23-46 mouchetures par
noyau). Les centromères étant des constrictions où
les fibres fusiformes s'attachent aux chromosomes, les
cellules mitotiques présenteront la même réaction de
moucheture dans la région chromosomique (12).
Synonymes: ACA, mouchetée discrète.
Antigènes nucléaires: Centromères chromosomiques
(kinétochores).
Associations cliniques: Suggère fortement un syn-
drome CREST*, variante de la sclérodermie (25).
* CREST est une forme de sclérodermie avec calcinose
marquée, syndrome de Raynaud, trouble fonctionnel
de l'œsophage, sclérodactylie et télangiectasie.
cEllulES mItotIQuES
Détection
Les cellules mitotiques doivent être visibles sur chaque
champ aux grossissements inférieurs ou égaux à 200X.
Pour vérifier si une cellule est en mitose, utiliser un gros-
sissement à 400X. Les cellules mitotiques présentent
une forme cellulaire arrondie caractéristique sans
membrane nucléaire détectable. La région chromo-
somique des cellules mitotiques présente généralement
une forme irrégulière, due à l'absence de membrane
nucléaire, ainsi qu'une constriction extrême des chro-
mosomes.
Les sérums positifs aux anticorps anti-ADN et/ou DNP
et/ou anti-histones (cas du contrôle positif homogène
d'Immuno Concepts) présenteront une fluorescence
intense de la région chromosomique de ces cellules.
Dans les échantillons négatifs aux anticorps anti-ADN
et/ou DNP et/ou anti-histones (cas du contrôle positif
moucheté d'Immuno Concepts), les cellules mitotiques
ne présenteront pas de fluorescence chromosomique
et peuvent s'avérer difficiles à voir.
utIlISatIon DES cEllulES mItotIQuES
Distinction anticorps mouchetés/anticorps homogènes:
Une image fluorescente finement mouchetée est
parfois difficile à différencier d'une fluorescence
homogène. Si le motif est homogène, la fluorescence
des chromosomes des cellules mitotiques sera uniforme.
Si l'image est parfaitement mouchetée, l'extérieur
des chromosomes présentera une réaction finement
mouchetée.
rEmarQuE: Si la fine moucheture de la totalité de
la cellule mitotique survient en même temps qu'une
fluorescence uniforme de la région chromosomique,
il est fort probable qu'au moins deux anticorps soient
présents. noterNoter la dilution de test comme étant
mouchetée/homogène et titrer chaque anticorps pour
obtenir un résultat.
MITOTIC CELL (Metaphase)
anticorps périphérique vs anticorps anti-membrane
nucléaire: Les anticorps qui présentent un motif péri-
phérique sont généralement associés à la présence
CELLULE MITOTIQUE
(Métaphase)
Chromosome Region
Cytoplasm/
Nucleoplasm
Région chromosomique
Cytoplasme /
Nucléoplasme
d'antigènes nucléaires anti-ADN/DNP. Les titres élevés
de ces anticorps suggèrent un LED. Dans les substrats
qui ne contiennent pas de cellules mitotiques, il peut
s'avérer difficile de distinguer le motif périphérique
de l'anticorps anti-membrane nucléaire. Ces motifs
peuvent être différenciés à l'aide des cellules en mitose
d'Immuno Concepts car la région chromosomique des
cellules mitotiques sera intensément colorée en cas de
motif périphérique mais ne sera pas colorée par les an-
ticorps anti-membrane nucléaire. Cette distinction est
importante d'un point de vue clinique car l'anticorps
anti-membrane nucléaire n'a pas de spécificité ADN/
DNP et n'est pas associé au LED (35).
anticorps anti-centromères (aca) vs. anticorps
mouchetés atypiques ressemblant au centromère:
Afin de vérifier l'anticorps anti-centromère, la région
chromosomique des cellules mitotiques doit être inten-
sément colorée avec des mouchetures discrètes. Si la
région chromosomique ne se colore pas, l'anticorps n'a
pas de spécificité kinétochore ni d'association avec
la variante CREST de la sclérodermie (36). Si la région
chromosomique ne se colore pas, l'anticorps n'est
pas anti-centromère et doit être noté comme étant «
moucheté atypique ».
FluorEScEncE cYtoPlaSmIQuE
Bien que les auto-anticorps anti-antigènes cytoplas-
miques soient rarement associés aux collagénoses, ils
peuvent être détectés à l'aide de substrats de culture
de cellules épithéliales (37). Les anticorps anti-mito-
chondries et anti-muscles lisses figurent parmi les deux
types d'anticorps les plus détectés et sont générale-
ment associés à une mononucléose infectieuse, à une
hépatite chronique active et à diverses pathologies
du foie (38- 39). Des anticorps anti-muscles lisses ont
également été décrits en utilisant un substrat de cellules
HEp-2 chez des patients qui ont des verrues (40).
anticorps anti-mitochondries (ama): Mouchetures
discrètes concentrées dans la région périnucléaire de
la cellule et dispersées en densité plus faible vers les
régions externes du cytoplasme. Cela doit être distin-
gué de l'anticorps dirigé contre l'appareil de Golgi,
qui ne colore généralement qu'un côté de la région
périnucléaire, ainsi que de l'anticorps anti-ribosome, qui
présente des mouchetures plus fines avec une appar-
ence en forme de brin correspondant à l'emplacement
du réticulum endoplasmique dans la cellule.
REMARQUE: Il est plus aisé de différencier les mouche-
tures périnucléaires de la fluorescence nucléaire
périphérique du fait que les mouchetures mitochondria-
les forment une fluorescence mouchetée interrompue
à l'extérieur de la membrane nucléaire, tandis que
les sérums périphériques forment une fluorescence
lisse uniforme à l'intérieur de la membrane nucléaire.
ENREGISTRER LES SÉRUMS COMME ÉTANT NÉGATIFS AUX
ANTICORPS ANTI-NUCLÉAIRES ET VÉRIFIER LA POSITIVITÉ
AUX ANTICORPS ANTI-MITOCHONDRIES SUR SUBSTRAT
SPÉCIFIQUE AUX AMA.
anticorps anti-muscles lisses (aSma): Fin réseau de
très fines fibres fluorescentes traversant entièrement le
cytoplasme. Contrairement aux anticorps anti-mito-
chondries, la fluorescence des anticorps anti-muscles
lisses est uniforme sur la totalité du cytoplasme et peut
également s'étendre sur le noyau. Dans les cellules mi-
totiques, on observe généralement de grosses mouche-
tures discrètes en dehors de la région chromosomique.
Il a été démontré que les anticorps anti-muscles lisses
comportaient une forte spécificité vis-à-vis de l'actine
(41-42). ENREGISTRER LES SÉRUMS COMME ÉTANT
NÉGATIFS AUX ANTICORPS ANTI-NUCLÉAIRES ET VÉRIFIER
LA POSITIVITÉ AUX ANTICORPS ANTI-MUSCLES LISSES SUR
SUBSTRAT SPÉCIFIQUE AUX ASMA.
NON-MITOTIC CELL (Interphase)
lImItES Du tESt
1. Le diagnostic ne peut pas être réalisé sur la base
de la détection des anticorps anti-nucléaires seuls.
CELLULE NON MITOTIQUE
(Interphase)
12
Cytoplasm
Nuclear Membrane
Nucleoplasm
Nucleoli
Cytoplasme
Membrane Nucléaire
Nucléoplasme
Nucléoles
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