Protocolo Del Ensayo - peviva M30 Apoptosense ELISA Gebrauchsanweisung

Instrucciones de uso
protegido de la luz. TMB Substrate no se puede utilizar después de haber estado
expuesto a la luz.
Si el kit se usa en varias ocasiones, guarde M30 Conjugate en el vial a 2–8 °C.
No exponer a la luz. La solución diluida de M30 Conjugate es estable durante
3 semanas.
La solución de lavado preparada es estable durante 5 semanas cuando se guarda
a 2 – 8 °C.

Protocolo del ensayo

El test M30 Apoptosense ELISA deberá llevarse a cabo a temperatura ambiente
(24 ± 3 °C).
1. Saque los reactivos y las muestras con tiempo para que estén a temperatura
ambiente cuando sea la hora de realizar el análisis. Antes de usarlos, pase
todos los reactivos por el agitador tipo vortex.
2. Disuelva la Wash Tablet en agua desionizada fresca (consulte "Preparación
de los componentes").
3. Diluya M30 HRP Conjugate con M30 Conjugate Dilution Buffer y mézclelos
(consulte "Preparación de los componentes").
4. Pipetee 25 µl por pocillo de M30 Standard (A–G), de M30 Control Low y M30
Control High o de las muestras (se recomienda tener duplicados).
5. Añada 75 µl de la solución diluida de M30 HRP Conjugate en cada pocillo.
Nota: los pasos 4 y 5 se deben hacer secuencialmente sin interrupción en un
plazo de 20 minutos.
6. Cubra los pocillos con cinta para sellar o una tapa de una placa de microv-
aloración.
7. Incube cuatro (4) horas en el agitador. Ajuste de velocidad: 600 rpm.
8. Lave la placa en un limpiador de placas cinco veces con 400–500 µl/pocillo
(lavado de sobreflujo)
o
Lave la placa manualmente, descartando la solución de incubación y lavan-
do los pocillos cinco (5) veces con 250 µl de la solución de lavado preparada
diluida. Evite la contaminación entre los pocillos.
9. Añada 200 µl de TMB Substrate a cada pocillo. Incúbelos en la oscuridad a
temperatura ambiente durante 20 ± 1 minutos.
10. Añada 50 µl de Stop Solution a cada pocillo. Para garantizar la mezcla com-
pleta de TMB Substrate y Stop Solution, agite la microplaca de 5 a 10 segun-
dos. Espere 5 minutos antes de leer la absorbancia.
11. Determine la absorbancia a 450 nm antes de los 30 minutos en un lector de
microplacas y anote los resultados.
12. Calcule los resultados como se describe en la Sección "Cálculo de resultados
analíticos".
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