Collecte Et Préparation Des Échantillons In Vitro Uniquement À Usage De Recherche - peviva M30 Apoptosense ELISA Gebrauchsanweisung

Mode d'emploi
Remarque :
pour un même projet, on devra utiliser le même type de matériel
biologique, c'est-à-dire de sérum ou de plasma collecté par une méthode don-
née. Pour plus d'informations sur la performance du test M30 Apoptosense
ELISA selon les différents types d'échantillons utilisés, veuillez consulter le site
www.vlvbio.com.
Conserver les échantillons entre 2 et 8 °C pendant un maximum de 4 heures.
Pour conserver les échantillons plus longtemps, congeler à une température
inférieure ou égale à -20 °C. Les échantillons peuvent être congelés et décongelés
sans perte d'activité, mais il est recommandé d'éviter toute congélation-
décongélation répétée. Concernant la dilution des échantillons, voir la section
« Caractéristiques de performance ».
Collecte et préparation des échantillons in vitro
uniquement à usage de recherche
Le test M30 Apoptosense ELISA a été utilisé pour des applications relatives à la
culture cellulaire dans un certain nombre d'études publiées (voir les références
sur www.vlvbio.com). Peviva a développé un produit spécifique destiné à la
culture cellulaire in vitro, M30 CytoDeath™ ELISA
(PEVIVA produit № 10900). Ce
produit possède une gamme dynamique et une sensibilité appropriées pour les
travaux in vitro.
Les protocoles suivants peuvent être utilisés pour détecter l'apoptose de cellules
en culture dérivées d'épithélium à l'aide du test M30 Apoptosense ELISA.
Préparation des échantillons à partir de cultures cellulaires
Pour de nombreuses applications, il convient de mesurer la réactivité totale de
M30 (K18Asp396) en un seul point tardif. Ces mesures permettent une évaluation
intégrée de l'apoptose. Afin de doser l'ensemble des fragments ccK18 dans les
milieux de culture cellulaire et les extraits cellulaires, ajouter un détergent non
ionique directement aux cellules dans leur milieu de culture.
Jour 1 : ensemencer les cellules. La densité d'ensemencement doit être
déterminée en fonction du type de cellules et de la nature de l'agent cytotoxique ;
5 000 à 10 000 cellules par puits donnent en général une densité adaptée pour
une microplaque de 96 puits.
Jour 2 : laver les cellules une fois avec du PBS et ajouter du milieu frais
(200 µL/puits). Exposer les cellules à l'agent ou aux agents de votre choix.
Jour 2 – 4 : pour des microplaques de 96 puits contenant 200 µL de milieu
par puits, ajouter 10 µL de NP-40 à 10 % par puits. Agiter pendant 5 minutes
à température ambiante sur un agitateur rotatif jusqu'à obtention de la lyse.
Mélanger doucement par aspiration/expulsion à l'aide d'une pipette, en
prenant garde d'éviter la formation de bulles d'air, puis transférer 2 × 25 µL de
milieu/lysat dans les puits M5 Coated Microstrips.
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